应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 双荧光酶素实验，奇怪结果！？!?
61/1返回列表
查看: 1607  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 双荧光酶素实验，奇怪结果！？!? 已有2人参与

其实做的是一个验证性实验，如下：
promega的NF-kB启动子质粒，转化测序后没问题，提取无内毒素质粒。
人类TLR3基因扩增，克隆进p3X-flag载体，测序无误，提无内毒素质粒。
HEK293前一天晚上种24孔板，第二天70-80%汇合度lipo2000转染，TLR3：NF-kB：pRL-TK=10:10:1，6小时后换生长液。
24小时后用polyIC浓度梯度刺激12h，后测双荧光。
结果萤火虫荧光值均在80左右，海参荧光随着刺激浓度增加而增加百倍以上，700、1700，3000这个样子的。
不知道为什么会出现这种情况，反应液和终止液都是分装好保存的。@hc-material@gyesang
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-05-14 18:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gzbjzjchen

铜虫 (小有名气)
说明这个是抑制转录?

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2018-07-31 19:45:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

PumbbaP

新虫 (初入文坛)
那个我想借楼求助一下，lipo2000同时转两种或者三种质粒的话，每种都500ng吗还是加起来500ng？以及lipo2000的量需要如何控制？以及换成无血清培养液的时候细胞飘起来怎么办？
赞一下 回复此楼
3楼2018-08-31 12:19:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xianke909

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

根据我们之前的经验，空细胞的荧光素酶背景就有300左右，所以是不是转染的问题？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2018-08-31 18:17:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖末子言

新虫 (小有名气)
1.转染效率低。我们平时都是10的4次方。2.底物1和2用的量少。3.polyic未刺激起来。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2019-04-29 12:20:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2019-04-29 22:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凯伦爱佳佳 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 11/550 2026-11-02 03:13 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:11 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:05 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 20/1000 2026-11-02 02:52 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-02 02:45 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 24/1200 2026-11-02 02:39 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 22:27 by xzcv0Tehd8lQ
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 22:27 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 22:11 by xzcv0Tehd8lQ
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 22:11 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 21:45 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-01 21:26 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 16:52 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 16:48 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 16:45 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 22/1100 2026-11-01 16:35 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 14:48 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭