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qPCR引物筛选
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新手求教，请问荧光定量pcr如何进行引物筛选实验？体系是多少，是用设计的引物进行正常pcr后看电泳结果是否有杂带吗，只跑出一条目的条带是不是就说明这条引物可以用于荧光定量实验？加96孔板前要进行预实验荧光检测吗，怎么进行检测呢？谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
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 体系试剂什么都是一样的。引物也不用筛选，直接在oligo或者PP5上设计出来给外面公司合成就行（赛默飞就很纯，完全不用担心有杂质）。引物一般是粉末状给你的，建议你先把这个引物稀释到适合浓度，然后去跑电泳，如果是一条带就基本说明引物没问题。做不出来一般都是你实验操作和环境问题，引物的筛选如果你找个好公司的话完全可以偷下懒。可以设置一个阴性对照、阳性对照，可以分别看看是不是环境污染或是实验步骤出错。扩增效率没问题情况是90%-110% R值最好>0.99 http://www.doc88.com/p-9955632672617.html |
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7楼2018-05-13 00:00:27
送红花一朵 |
就是设计好引物然后直接扩增跑电泳，如果检测只有一条目的条带就可以直接拿来这对引物来做荧光定量了是吧？荧光定量结果只要R方大于0.99，没有双峰就说明这次荧光定量实验结果能用是吗 发自小木虫Android客户端 |
8楼2018-05-13 10:19:52