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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

[交流] 为什么有酶活,但纯化不出蛋白?

遇到一个很奇怪的事,感觉蛋白像不表达,但破碎纯化后能测出有酶活,用的是DNS法测的酶活,酶活明显受温度、时间、PH等影响,但过ni柱纯化跑胶却没有条带,另外用不浓度诱导剂也看不出梯度差。请问一下,我这个蛋白表达了吗?为什么会出现这现象??

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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

2楼2018-05-10 09:26:53
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hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
破碎后先跟诱导前的样品对比看有没有表达,若表达了,看表达量,在去分析没挂镍柱的原因,没挂镍柱有很多原因,比如柱子没平衡好,HIS标签在蛋白结构里面,未暴露出来等等。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2018-05-10 11:23:58
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-10 11:23:58
破碎后先跟诱导前的样品对比看有没有表达,若表达了,看表达量,在去分析没挂镍柱的原因,没挂镍柱有很多原因,比如柱子没平衡好,HIS标签在蛋白结构里面,未暴露出来等等。

谢谢,用不同浓度的IPTG看不出变化,会不会LB培养基里面含一些其他成分会诱导表达?直接煮的时候,有一条条带大小和我的目的条带差不多,可以就是不挂柱,也许是我缓冲液ph不对?我的缓冲液是7.0,我打算换7.4试试。

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4楼2018-05-11 09:18:53
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hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
表达与很多因素有关,不只是IPTG的量,还有温度,时间,启动子等有关,看你描述的估计没表达

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5楼2018-05-11 13:08:20
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

ni柱没挂住吧
人的一生可以没有荣誉和鲜花,可不能没有自尊!
6楼2018-05-12 09:50:45
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by tuhangul622 at 2018-05-12 09:50:45
ni柱没挂住吧

不知道啊

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7楼2018-05-15 16:56:08
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-11 13:08:20
表达与很多因素有关,不只是IPTG的量,还有温度,时间,启动子等有关,看你描述的估计没表达

没表达又有酶活,让我很尴尬

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8楼2018-05-15 16:56:30
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hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有种自诱导的现象可以了解了解,问题描述没细节,不好分析!

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9楼2018-05-15 23:26:18
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