应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 为什么有酶活，但纯化不出蛋白？
91/1返回列表
查看: 1329  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

[交流] 为什么有酶活，但纯化不出蛋白？

遇到一个很奇怪的事，感觉蛋白像不表达，但破碎纯化后能测出有酶活，用的是DNS法测的酶活，酶活明显受温度、时间、PH等影响，但过ni柱纯化跑胶却没有条带，另外用不浓度诱导剂也看不出梯度差。请问一下，我这个蛋白表达了吗？为什么会出现这现象？？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-05-10 09:15:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
有没有大神？

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2018-05-10 09:26:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
破碎后先跟诱导前的样品对比看有没有表达，若表达了，看表达量，在去分析没挂镍柱的原因，没挂镍柱有很多原因，比如柱子没平衡好，HIS标签在蛋白结构里面，未暴露出来等等。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

拂柳飞絮
3楼2018-05-10 11:23:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-10 11:23:58
破碎后先跟诱导前的样品对比看有没有表达，若表达了，看表达量，在去分析没挂镍柱的原因，没挂镍柱有很多原因，比如柱子没平衡好，HIS标签在蛋白结构里面，未暴露出来等等。

谢谢，用不同浓度的IPTG看不出变化，会不会LB培养基里面含一些其他成分会诱导表达？直接煮的时候，有一条条带大小和我的目的条带差不多，可以就是不挂柱，也许是我缓冲液ph不对？我的缓冲液是7.0，我打算换7.4试试。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2018-05-11 09:18:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
表达与很多因素有关，不只是IPTG的量，还有温度，时间，启动子等有关，看你描述的估计没表达

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2018-05-11 13:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuhangul622

金虫 (小有名气)
ni柱没挂住吧
回复此楼
人的一生可以没有荣誉和鲜花，可不能没有自尊！
6楼2018-05-12 09:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tuhangul622 at 2018-05-12 09:50:45
ni柱没挂住吧

不知道啊

发自小木虫Android客户端
回复此楼
7楼2018-05-15 16:56:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-11 13:08:20
表达与很多因素有关，不只是IPTG的量，还有温度，时间，启动子等有关，看你描述的估计没表达

没表达又有酶活，让我很尴尬

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2018-05-15 16:56:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有种自诱导的现象可以了解了解，问题描述没细节，不好分析！

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-05-15 23:26:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 拂柳飞絮 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭