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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 为什么有酶活，但纯化不出蛋白？
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)

[交流] 为什么有酶活，但纯化不出蛋白？

遇到一个很奇怪的事，感觉蛋白像不表达，但破碎纯化后能测出有酶活，用的是DNS法测的酶活，酶活明显受温度、时间、PH等影响，但过ni柱纯化跑胶却没有条带，另外用不浓度诱导剂也看不出梯度差。请问一下，我这个蛋白表达了吗？为什么会出现这现象？？

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1楼 2018-05-10 09:15:46
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
有没有大神？

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2楼2018-05-10 09:26:53
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hc-material

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★
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破碎后先跟诱导前的样品对比看有没有表达，若表达了，看表达量，在去分析没挂镍柱的原因，没挂镍柱有很多原因，比如柱子没平衡好，HIS标签在蛋白结构里面，未暴露出来等等。
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拂柳飞絮
3楼2018-05-10 11:23:58
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-10 11:23:58
破碎后先跟诱导前的样品对比看有没有表达，若表达了，看表达量，在去分析没挂镍柱的原因，没挂镍柱有很多原因，比如柱子没平衡好，HIS标签在蛋白结构里面，未暴露出来等等。

谢谢，用不同浓度的IPTG看不出变化，会不会LB培养基里面含一些其他成分会诱导表达？直接煮的时候，有一条条带大小和我的目的条带差不多，可以就是不挂柱，也许是我缓冲液ph不对？我的缓冲液是7.0，我打算换7.4试试。

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4楼2018-05-11 09:18:53
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
表达与很多因素有关，不只是IPTG的量，还有温度，时间，启动子等有关，看你描述的估计没表达

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5楼2018-05-11 13:08:20
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tuhangul622

金虫 (小有名气)
ni柱没挂住吧
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人的一生可以没有荣誉和鲜花，可不能没有自尊！
6楼2018-05-12 09:50:45
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tuhangul622 at 2018-05-12 09:50:45
ni柱没挂住吧

不知道啊

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7楼2018-05-15 16:56:08
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拂柳飞絮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-11 13:08:20
表达与很多因素有关，不只是IPTG的量，还有温度，时间，启动子等有关，看你描述的估计没表达

没表达又有酶活，让我很尴尬

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8楼2018-05-15 16:56:30
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
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有种自诱导的现象可以了解了解，问题描述没细节，不好分析！

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9楼2018-05-15 23:26:18
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