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Karida_14

新虫 (小有名气)

[求助] sds page求解决跑胶问题,希望能跑的美观 已有2人参与

我想问sds-page的loading buffer的用量如何来确定,怎么样才能跑出清晰好看的条带,包括上样量一般经验值加多少?我跑胶的泳道有的一条都是糊的有的条带很浅,是上样量大了吗,还是loading加少了浓度大了才糊
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)

主要是上样量的问题,一般每泳道10ug就可以了,

发自小木虫Android客户端
2楼2018-04-22 20:18:42
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k_gq

新虫 (初入文坛)

样品:buffer=1:4
3楼2018-04-23 09:59:58
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蔚灵海

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你的样品浓度吧,尽量不要让样品浓度太高,上样:将蛋白样品与2×loading buffer进行1:1混合均匀,加热处理。注意枪头不要戳破凝胶,不要过度插入梳孔使胶板变型造成漏液。
4楼2018-04-23 12:43:45
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leister

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

loading buffer 通常是2x 的,也就是你等体积的与你的蛋白样品混合。你说的条带糊是什么样子,能贴个图上来吗?
如果是全细胞裂解液,你要注意 DNA。DNA 会让你的样品变得很粘稠,加样的时候就可以感觉得到,像鼻涕一样。这样跑出来的胶会是一片糊。snonicate 一下或者多 votex 几次时间长些就会好了。样品的量与你染色方法和目的蛋白的含量有关系。通常的考染总蛋白10ug 应该是可以的。
5楼2018-05-16 13:27:02
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