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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » sds page求解决跑胶问题，希望能跑的美观
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Karida_14

新虫 (小有名气)

[求助] sds page求解决跑胶问题，希望能跑的美观 已有2人参与

我想问sds-page的loading buffer的用量如何来确定，怎么样才能跑出清晰好看的条带，包括上样量一般经验值加多少？我跑胶的泳道有的一条都是糊的有的条带很浅，是上样量大了吗，还是loading加少了浓度大了才糊
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1楼 2018-04-22 17:29:42
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)
主要是上样量的问题，一般每泳道10ug就可以了，

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2楼2018-04-22 20:18:42
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k_gq

新虫 (初入文坛)
样品：buffer=1:4
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3楼2018-04-23 09:59:58
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蔚灵海

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你的样品浓度吧，尽量不要让样品浓度太高，上样：将蛋白样品与2×loading buffer进行1：1混合均匀，加热处理。注意枪头不要戳破凝胶，不要过度插入梳孔使胶板变型造成漏液。
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4楼2018-04-23 12:43:45
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leister

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

loading buffer 通常是2x 的，也就是你等体积的与你的蛋白样品混合。你说的条带糊是什么样子，能贴个图上来吗？
如果是全细胞裂解液，你要注意 DNA。DNA 会让你的样品变得很粘稠，加样的时候就可以感觉得到，像鼻涕一样。这样跑出来的胶会是一片糊。snonicate 一下或者多 votex 几次时间长些就会好了。样品的量与你染色方法和目的蛋白的含量有关系。通常的考染总蛋白10ug 应该是可以的。
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5楼2018-05-16 13:27:02
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