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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » DNA重组测序不成功
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小小艾999

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA重组测序不成功

目的基因载体质粒PCR之后，跑电泳见10000左右条带，单酶切后，跑电泳见8000左右条带，然后自连，转DH5阿尔法细胞，挑单克隆，摇菌，送测序，公司没测出来？!     自己又把那天摇的菌提了个质粒，跑电泳，只有2000左右条带!!    实验小白，求助各位师兄姐，这是怎么回事 ?   我要的目的条带应该大约在8000左右。

@biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-04-17 17:20:51
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小小艾999

新虫 (初入文坛)
对照组没有长  所以就直接送测序了  但是我没有验证菌液     谢谢

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4楼2018-04-18 09:24:15
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无心云朵

银虫 (初入文坛)
涂板后，你先挑单克隆菌体，做个PCR鉴定，你自己找筛选一遍哈，一般转化实验都会有假阳性，最后你才将PCR菌落鉴定阳性菌去测序，这样可靠性更大～

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2楼2018-04-18 08:28:40
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小小艾999

新虫 (初入文坛)
做了酶切产物的对照

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3楼2018-04-18 09:22:20
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