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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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mixy

铜虫 (初入文坛)

[交流] pcr产物切胶回收浓度低

重复多次,pcr产物切胶后回收浓度一直很低,在30-40ng/ul之间徘徊。哪位高人指教一下?万分感谢

谢谢大家。补充说明一下:我的片段长度为4.8kb,用的回收试剂盒是takara的,回收用的双蒸水也经过了加热,pcr每次都是做了6管,合到一管进行回收,加的洗脱液(双蒸水)为最小体积25ul

[ Last edited by mixy on 2009-3-18 at 21:16 ]
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


mixy(金币+1,VIP+0):很详细,谢~ 3-22 10:46
建议如下:
1 如果试剂盒没有问题的话,严格按照要求做就可以了(主要是乙醇一定要会发干净,否则影响回收率),最后加DNA buffer(ddH2O)洗柱的时候少加一些
2 换一个进口的试剂盒,因为切胶回收的效率本身就很低
3 在pcr的时候多做几个tube,最后混到一起纯化,洗柱的时候少加DNA buffer(ddH2O)

[ Last edited by sutao1979 on 2009-3-18 at 19:31 ]
会当凌绝顶,一览众山小
4楼2009-03-18 19:26:40
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zl382

铁虫 (小有名气)

多大片段?如果片段小要加异丙醇沉一下;
还有洗脱buffer或水在65度预热好洗脱效果会更好;
另外Axygen的回收试剂盒回收效果挺好的。
后退,绝对是无路可走!
2楼2009-03-18 11:07:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

用QIAGEN的试剂盒,全世界最好的,毫无疑问的……
3楼2009-03-18 11:10:32
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spring0304

木虫 (小有名气)

1.多做几管
2.洗脱液要65度水浴,且一定要加在柱膜上,一般40ul左右,要将柱膜覆盖。
5楼2009-03-21 10:26:40
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