24小时热门版块排行榜    

查看: 2090  |  回复: 10
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

mixy

铜虫 (初入文坛)

[交流] pcr产物切胶回收浓度低

重复多次,pcr产物切胶后回收浓度一直很低,在30-40ng/ul之间徘徊。哪位高人指教一下?万分感谢

谢谢大家。补充说明一下:我的片段长度为4.8kb,用的回收试剂盒是takara的,回收用的双蒸水也经过了加热,pcr每次都是做了6管,合到一管进行回收,加的洗脱液(双蒸水)为最小体积25ul

[ Last edited by mixy on 2009-3-18 at 21:16 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

用QIAGEN的试剂盒,全世界最好的,毫无疑问的……
3楼2009-03-18 11:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

zl382

铁虫 (小有名气)

多大片段?如果片段小要加异丙醇沉一下;
还有洗脱buffer或水在65度预热好洗脱效果会更好;
另外Axygen的回收试剂盒回收效果挺好的。
后退,绝对是无路可走!
2楼2009-03-18 11:07:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


mixy(金币+1,VIP+0):很详细,谢~ 3-22 10:46
建议如下:
1 如果试剂盒没有问题的话,严格按照要求做就可以了(主要是乙醇一定要会发干净,否则影响回收率),最后加DNA buffer(ddH2O)洗柱的时候少加一些
2 换一个进口的试剂盒,因为切胶回收的效率本身就很低
3 在pcr的时候多做几个tube,最后混到一起纯化,洗柱的时候少加DNA buffer(ddH2O)

[ Last edited by sutao1979 on 2009-3-18 at 19:31 ]
会当凌绝顶,一览众山小
4楼2009-03-18 19:26:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spring0304

木虫 (小有名气)

1.多做几管
2.洗脱液要65度水浴,且一定要加在柱膜上,一般40ul左右,要将柱膜覆盖。
5楼2009-03-21 10:26:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 两姐妹,一个辛辛苦苦30岁工作当大学教师,另一个23岁就工作当开车教练 +3 瞬息宇宙 2026-08-11 5/250 2026-08-18 14:55 by LNP@mRNA
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +46 医学老男孩 2026-08-13 102/5100 2026-08-18 14:41 by qinwangshen
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 5/250 2026-08-18 11:25 by 無關想念
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +5 基诺咪客 2026-08-17 6/300 2026-08-18 11:06 by hunter无悔
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
请填处理意见