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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pcr产物切胶回收浓度低
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mixy

铜虫 (初入文坛)

[交流] pcr产物切胶回收浓度低

重复多次，pcr产物切胶后回收浓度一直很低，在30-40ng/ul之间徘徊。哪位高人指教一下？万分感谢

谢谢大家。补充说明一下：我的片段长度为4.8kb，用的回收试剂盒是takara的，回收用的双蒸水也经过了加热，pcr每次都是做了6管，合到一管进行回收，加的洗脱液（双蒸水）为最小体积25ul

[ Last edited by mixy on 2009-3-18 at 21:16 ]
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1楼 2009-03-18 11:00:56
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zl382

铁虫 (小有名气)
多大片段？如果片段小要加异丙醇沉一下；
还有洗脱buffer或水在65度预热好洗脱效果会更好；
另外Axygen的回收试剂盒回收效果挺好的。
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后退，绝对是无路可走！
2楼2009-03-18 11:07:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
用QIAGEN的试剂盒，全世界最好的，毫无疑问的……
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3楼2009-03-18 11:10:32
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
mixy(金币+1,VIP+0):很详细，谢~ 3-22 10:46
建议如下：
1 如果试剂盒没有问题的话，严格按照要求做就可以了（主要是乙醇一定要会发干净，否则影响回收率），最后加DNA buffer（ddH2O）洗柱的时候少加一些
2 换一个进口的试剂盒，因为切胶回收的效率本身就很低
3 在pcr的时候多做几个tube，最后混到一起纯化,洗柱的时候少加DNA buffer（ddH2O）

[ Last edited by sutao1979 on 2009-3-18 at 19:31 ]
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会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-03-18 19:26:40
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spring0304

木虫 (小有名气)
1.多做几管
2.洗脱液要65度水浴，且一定要加在柱膜上，一般40ul左右，要将柱膜覆盖。
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5楼2009-03-21 10:26:40
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bingdong05

银虫 (正式写手)
★
mixy(金币+1,VIP+0):玻璃奶没有用过，这个主意不错 3-22 10:46
建议楼主用玻璃奶回收下试试，因为用试剂盒虽然照说明操作即可，但最后的总体积不能控制，用玻璃奶的话最后可以控制加水的体积，以前也遇到过这种情况，师兄建议用玻璃奶试下，结果还可以
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6楼2009-03-21 10:38:29
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your2007

至尊木虫 (著名写手)
不妨用DNA浓缩仪，这样就解决问题啦，如果楼主的后续实验对浓度要求不是很高，没有必要做这些了，
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爱人者被爱，敬人者人敬
7楼2009-03-21 11:18:06
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
你的产物在胶上的浓度是否很亮啊？
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
8楼2009-03-21 13:42:53
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chuyinghao

铁杆木虫 (职业作家)
个人建议调整下退火温度！这样你的目的条带才会亮的，做六管不算少了！还有就是最后少加水！不行做12管一起胶回收！！！！
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9楼2009-03-21 13:49:20
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mixy

铜虫 (初入文坛)
在胶上浓度依然很低……试了下put down,效果好些了
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10楼2009-03-22 10:45:14
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