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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请帮我看看我提的RNA
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zhaoyue_82

铁虫 (小有名气)

[交流] 请帮我看看我提的RNA

我提的是一种药用植物金线莲的叶片，用的是TRIZOL法，总是降解，请各位高手指点一下

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:21 ]
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1楼 2009-03-16 16:16:02
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虫子739

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖 4-14 22:02
我提出来差不多也是这种效果。有经验的人总说要注意研磨时的液氮保护，可是还是达不到28S的亮度是18S的两倍。
我用的差不多质量的RNA做反转录后，内参的PCR结果是有的，但目的基因的条带没有。你要用它干什么？
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2楼2009-03-16 16:26:31
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zhaoyue_82

铁虫 (小有名气)
多谢回复！
我是用来做差异基因的，打算做SSH，对RNA质量要求蛮高的，一个做过的师兄提出来的图特别漂亮，5S很淡，28S明显是18S的两倍，我就是提不出来
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3楼2009-03-16 17:03:00
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zhaoyue_82

铁虫 (小有名气)
请问你提的时候有专门的RNA操作区吗？我们实验室条件差，只能在普通的试验台上提，用酒精擦擦就不错了。有人说还得在超净台里提。
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4楼2009-03-16 17:04:34
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
首先确定你跑的是否是变性胶，通常的agarose gel跑出来的条带很容易降解的，这也是一个原因
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会当凌绝顶，一览众山小
5楼2009-03-16 17:41:08
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xiaolei8555

铁杆木虫 (正式写手)
没有必要在超净工作台里操作，只要离心管、枪头用DEPC处理好了，试剂没问题，提取过程中细心，尽量避免空气大幅度流动， 提取过程中RNA基本不会降解。我用CTAB法提的，跑的是agarose gel +EB胶。我做cDNA-AFLP的。
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6楼2009-03-16 18:14:27
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2009-3-16 17:41:
首先确定你跑的是否是变性胶，通常的agarose gel跑出来的条带很容易降解的，这也是一个原因

你好   我用变性胶电泳  使用goldview染液，直接加到未凝固的胶里，跑出来的结果是一半亮一半暗，可能把RNA的亮带盖住了，看不见，该如何解决？谢谢……你用的是什么染液，如何做的使之跑出条带？
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7楼2009-03-16 18:41:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
用EB染就可以了
这种提取质量可以了
绝对可以做出实验来，因为你内参都扩出来了
目的基因没扩出来考虑PCR的体系问题，比如用好一点的逆转录酶和Taq酶
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8楼2009-03-16 19:36:37
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zhaoyue_82

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by x8q4h11 at 2009-3-16 18:41:


你好   我用变性胶电泳  使用goldview染液，直接加到未凝固的胶里，跑出来的结果是一半亮一半暗，可能把RNA的亮带盖住了，看不见，该如何解决？谢谢……你用的是什么染液，如何做的使之跑出条带？

你好，我师兄告诉我说RNA要用EB染，原来我也用goldview，现在改EB了，我自己觉得比原来效果好，不知道为什么，但是你可以试试
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9楼2009-03-16 20:10:04
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zhaoyue_82

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2009-3-16 17:41:
首先确定你跑的是否是变性胶，通常的agarose gel跑出来的条带很容易降解的，这也是一个原因

恩，我没有跑变性胶，我看好多人说只看效果的话不用跑变性的，那我下次试试跑变性胶吧，多谢
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10楼2009-03-16 20:14:05
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