| 查看: 1340 | 回复: 4 | |||
[交流]
BL21感受态细胞 已有2人参与
|
|
T载体和目标基因连接以后，转化到DH5a中，成功测序后，得到目的基因。再将目的基因与PET15b载体连接后，转化到BL21菌中后涂板，进行表达。但是不知道什么原因，阴阳对照和连接基因都没有产生菌株。LB固体培养基上涂了AMP抗生素。第一次使用BL21，我们实验的BL21已经在-70度的冰箱里冻存两年多了，我制作感受态细胞前，为了提高它的活力，接种了两次培养了差不多两个天后才制作感受态。制作感受态时，OD600值0.52左右。各位老师，会是BL21菌株出问题么？ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有80人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3280.1
- 散金: 1055
- 红花: 26
- 帖子: 841
- 在线: 878.8小时
- 虫号: 3340869
- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励热心回帖交流 2018-03-23 07:55:26
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励热心回帖交流 2018-03-23 07:55:26
|
用个质粒（浓度控制在50-100ng）转下你做的感受态就能检测下感受态出没出问题，如果把菌液全涂了长满了板，感受态应该没有问题，如果长得少，说明感受态效率不行。要么重做要么买商业感受态。你这种情况，基本上是片段和载体没有连接成功。看你的描述应该是做双酶切连接吧，这比T载体连接要困难些。注意摩尔比的计算,给你一个例子，自己慢慢去体会。 假如插入片段和载体的连接比例为3:1，如连接反应中加入3kb 载体50ng，0.5kb PCR 产物需加入多少？ (50ng载体×0.5kb插入片段/3.0kb载体) ×3/1 =25ng 插入片段 |
2楼2018-03-22 03:47:34
3楼2018-03-22 19:32:01
youcaoke
银虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 5242.1
- 散金: 773
- 红花: 8
- 沙发: 1
- 帖子: 1609
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 205979
- 注册: 2006-03-03
- 性别: GG
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
4楼2018-03-23 10:47:22
5楼2018-03-23 14:03:35
