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BL21感受态细胞已有2人参与
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T载体和目标基因连接以后，转化到DH5a中，成功测序后，得到目的基因。再将目的基因与PET15b载体连接后，转化到BL21菌中后涂板，进行表达。但是不知道什么原因，阴阳对照和连接基因都没有产生菌株。LB固体培养基上涂了AMP抗生素。第一次使用BL21，我们实验的BL21已经在-70度的冰箱里冻存两年多了，我制作感受态细胞前，为了提高它的活力，接种了两次培养了差不多两个天后才制作感受态。制作感受态时，OD600值0.52左右。各位老师，会是BL21菌株出问题么？ 发自小木虫IOS客户端 |
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5楼2018-03-23 14:03:35
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励热心回帖交流 2018-03-23 07:55:26
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西门吹雪170: 金币+4, 鼓励热心回帖交流 2018-03-23 07:55:26
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用个质粒（浓度控制在50-100ng）转下你做的感受态就能检测下感受态出没出问题，如果把菌液全涂了长满了板，感受态应该没有问题，如果长得少，说明感受态效率不行。要么重做要么买商业感受态。你这种情况，基本上是片段和载体没有连接成功。看你的描述应该是做双酶切连接吧，这比T载体连接要困难些。注意摩尔比的计算,给你一个例子，自己慢慢去体会。 假如插入片段和载体的连接比例为3:1，如连接反应中加入3kb 载体50ng，0.5kb PCR 产物需加入多少？ (50ng载体×0.5kb插入片段/3.0kb载体) ×3/1 =25ng 插入片段 |
2楼2018-03-22 03:47:34
3楼2018-03-22 19:32:01
youcaoke
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4楼2018-03-23 10:47:22