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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RT-PCR
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亦木水

铜虫 (小有名气)

[交流] RT-PCR

从酵母提取RNA做RT-PCR，目的片段是2.5kb
现在将PCR结果上传，请帮我看看到底什么原因
最左边是Marker最右边的是RNA,中间的是PCR产物

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-1 at 13:18 ]
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1楼 2009-03-12 00:22:10
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亦木水

铜虫 (小有名气)
感觉最右端的不是RNA啊，虫友们怎么看
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2楼2009-03-12 00:23:43
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
亦木水(金币+1):谢谢参与
好多染料啊
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金币是赌出来的
3楼2009-03-12 10:10:57
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虫子739

铁虫 (小有名气)
我提出的RNA的条带也比你的大不了多少，不知道这种现象是否真确？你的目的PCR条带出现了呀，只是条带较淡，可能是PCR条件不太合适。可以改进一下PCR条件，希望你能多交流RT-PCR
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4楼2009-03-16 16:37:58
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亦木水

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 虫子739 at 2009-3-16 16:37:
我提出的RNA的条带也比你的大不了多少，不知道这种现象是否真确？你的目的PCR条带出现了呀，只是条带较淡，可能是PCR条件不太合适。可以改进一下PCR条件，希望你能多交流RT-PCR

我重复过，但一直就没重复出来，图上的结果太淡回收出来什么也没有。
估计还是RNA提的问题，我用的是Takara的isoregent提的，效果不咋的。
RT-PCR也是买的Takara的kit，里面的步骤和其他查的资料上有点不同，这个实验我已经忙了几个月了。。。
痛苦
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5楼2009-03-17 12:21:50
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虫子739

铁虫 (小有名气)
噢，我也做了一个多月了！老是会碰到一些棘手的问题！我用的也是Takara的RNAiso试剂，我说呢，怎么跟我提取的RNA条带相似，原来用的一个厂家的东西！每次5S 都比较亮。、
听说天根的RNA提取试剂盒不错，你要有条件试试，别忘了公布一下结果哦！
听说Takara的反转录酶可以，不用买试剂盒。我用的是天根的反转录试剂盒，我也还对此产品持着怀疑态度！
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6楼2009-03-18 12:13:57
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虫子739

铁虫 (小有名气)
建议你把条带淡的，做下二次PCR，看效果如何？关注着~祝你好运
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7楼2009-03-18 12:15:19
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wangtengxu

木虫 (正式写手)
本人也在为RNA质量烦恼中
时好时不好
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想和有趣的人一起做有趣的事。
8楼2009-03-20 16:00:20
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jasco

木虫 (正式写手)
rna的质量做rtpcr足够了，pcr条带也出来了，我觉得pcr条件优化一下，或者用pcr产物当模板再做一轮pcr应该就行了

试剂方面还是trizol+SuperScript III最好
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9楼2009-03-20 17:12:01
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2009/3/20, 17:12:
试剂方面还是trizol+SuperScript III最好

支持，trizol是很经典很稳定的试剂
而SuperScript III则是目前世界上最好的逆转录酶，当然也很贵
如果负担不起可以考虑用invitrogen的M-MLV
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10楼2009-03-20 17:47:47
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