24小时热门版块排行榜    

查看: 1087  |  回复: 16
当前主题已经存档。

亦木水

铜虫 (小有名气)

谢谢几位的意见啊,我下周再做试试,bless me !
11楼2009-03-20 22:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)

终于有结果了

周一重新做的,提取RNA前用蜗牛酶破壁了一个小时,用TAKARA的RNAiso试剂提的。做RTPCR买的是TAKARA的KIT(AMV.Ver.3.0),第一步反转录反应时,先加RNA和Oligo(dT)引物,60°水浴了5分钟,然后冰浴终止,然后是按照操作说明加入其他试剂反应。第二步PCR反应就按说明来做的。
PCR结果比第一次好的多了,至少这次一眼能看出来,不像上面的图还要仔细找。当晚把胶回收了。
周二用胶回收的PCR产物和PCR反应液做PCR,这次我用了PCR MASTER和上面KIT里带的两种酶做的,共四个样。做出来结果不错。用胶回收的产物做出的亮度很高,用PCR反应液做的也有目的条带,只是暗点。两种酶比较下来,还是KIT里带的那个酶强。晚上回收了两个样,做T载体连接。

终于把RTPCR这个坎迈过了,上学期期末就开始做了,筛酵母,破壁,PCR,每个环节都花了很多时间。下面连接转化,构建酵母表达系统估计也是长路漫漫。
虫友们一起加油!
12楼2009-03-25 10:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 亦木水 at 2009-3-25 10:01:
周一重新做的,提取RNA前用蜗牛酶破壁了一个小时,用TAKARA的RNAiso试剂提的。做RTPCR买的是TAKARA的KIT(AMV.Ver.3.0),第一步反转录反应时,先加RNA和Oligo(dT)引物,60°水浴了5分钟,然后冰浴终止,然后是 ...

你好,我想问一下你用PCR回收产物做PCr时,模板加多少?谢谢
13楼2009-04-21 19:36:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by x8q4h11 at 2009-4-21 19:36:

你好,我想问一下你用PCR回收产物做PCr时,模板加多少?谢谢

我加2ul
14楼2009-04-23 12:37:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 亦木水 at 2009-4-23 12:37:


我加2ul

谢谢。还想问一下,你是使用50微升体系,直接加2微升回收产物做模板吗?不用稀释吗?
15楼2009-04-23 21:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by x8q4h11 at 2009-4-23 21:26:

谢谢。还想问一下,你是使用50微升体系,直接加2微升回收产物做模板吗?不用稀释吗?

回收的产物浓度不高的啊,我的体系是25ul的
16楼2009-04-24 21:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 亦木水 at 2009-4-24 21:14:


回收的产物浓度不高的啊,我的体系是25ul的

谢谢
17楼2009-04-25 10:40:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 亦木水 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见