应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RT-PCR
172/2返回列表上一页12
查看: 1148  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

亦木水

铜虫 (小有名气)
谢谢几位的意见啊，我下周再做试试，bless me !
赞一下 回复此楼
11楼2009-03-20 22:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)

终于有结果了

周一重新做的，提取RNA前用蜗牛酶破壁了一个小时，用TAKARA的RNAiso试剂提的。做RTPCR买的是TAKARA的KIT（AMV.Ver.3.0），第一步反转录反应时，先加RNA和Oligo（dT）引物，60°水浴了5分钟，然后冰浴终止，然后是按照操作说明加入其他试剂反应。第二步PCR反应就按说明来做的。
PCR结果比第一次好的多了，至少这次一眼能看出来，不像上面的图还要仔细找。当晚把胶回收了。
周二用胶回收的PCR产物和PCR反应液做PCR，这次我用了PCR MASTER和上面KIT里带的两种酶做的，共四个样。做出来结果不错。用胶回收的产物做出的亮度很高，用PCR反应液做的也有目的条带，只是暗点。两种酶比较下来，还是KIT里带的那个酶强。晚上回收了两个样，做T载体连接。

终于把RTPCR这个坎迈过了，上学期期末就开始做了，筛酵母，破壁，PCR，每个环节都花了很多时间。下面连接转化，构建酵母表达系统估计也是长路漫漫。
虫友们一起加油！
赞一下 回复此楼
12楼2009-03-25 10:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 亦木水 at 2009-3-25 10:01:
周一重新做的，提取RNA前用蜗牛酶破壁了一个小时，用TAKARA的RNAiso试剂提的。做RTPCR买的是TAKARA的KIT（AMV.Ver.3.0），第一步反转录反应时，先加RNA和Oligo（dT）引物，60°水浴了5分钟，然后冰浴终止，然后是 ...

你好，我想问一下你用PCR回收产物做PCr时，模板加多少？谢谢
赞一下 回复此楼
13楼2009-04-21 19:36:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by x8q4h11 at 2009-4-21 19:36:

你好，我想问一下你用PCR回收产物做PCr时，模板加多少？谢谢

我加2ul
回复此楼
14楼2009-04-23 12:37:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 亦木水 at 2009-4-23 12:37:


我加2ul

谢谢。还想问一下，你是使用50微升体系，直接加2微升回收产物做模板吗？不用稀释吗？
赞一下 回复此楼
15楼2009-04-23 21:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by x8q4h11 at 2009-4-23 21:26:

谢谢。还想问一下，你是使用50微升体系，直接加2微升回收产物做模板吗？不用稀释吗？

回收的产物浓度不高的啊，我的体系是25ul的
赞一下 回复此楼
16楼2009-04-24 21:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 亦木水 at 2009-4-24 21:14:


回收的产物浓度不高的啊，我的体系是25ul的

谢谢
回复此楼
17楼2009-04-25 10:40:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 亦木水 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 20:58 by Equinoxhua
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +5 13108017953 2026-09-21 5/250 2026-09-27 16:46 by Leogzhya
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:03 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭