24小时热门版块排行榜    

查看: 959  |  回复: 16
当前主题已经存档。

亦木水

铜虫 (小有名气)

谢谢几位的意见啊,我下周再做试试,bless me !
11楼2009-03-20 22:02:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)

终于有结果了

周一重新做的,提取RNA前用蜗牛酶破壁了一个小时,用TAKARA的RNAiso试剂提的。做RTPCR买的是TAKARA的KIT(AMV.Ver.3.0),第一步反转录反应时,先加RNA和Oligo(dT)引物,60°水浴了5分钟,然后冰浴终止,然后是按照操作说明加入其他试剂反应。第二步PCR反应就按说明来做的。
PCR结果比第一次好的多了,至少这次一眼能看出来,不像上面的图还要仔细找。当晚把胶回收了。
周二用胶回收的PCR产物和PCR反应液做PCR,这次我用了PCR MASTER和上面KIT里带的两种酶做的,共四个样。做出来结果不错。用胶回收的产物做出的亮度很高,用PCR反应液做的也有目的条带,只是暗点。两种酶比较下来,还是KIT里带的那个酶强。晚上回收了两个样,做T载体连接。

终于把RTPCR这个坎迈过了,上学期期末就开始做了,筛酵母,破壁,PCR,每个环节都花了很多时间。下面连接转化,构建酵母表达系统估计也是长路漫漫。
虫友们一起加油!
12楼2009-03-25 10:01:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 亦木水 at 2009-3-25 10:01:
周一重新做的,提取RNA前用蜗牛酶破壁了一个小时,用TAKARA的RNAiso试剂提的。做RTPCR买的是TAKARA的KIT(AMV.Ver.3.0),第一步反转录反应时,先加RNA和Oligo(dT)引物,60°水浴了5分钟,然后冰浴终止,然后是 ...

你好,我想问一下你用PCR回收产物做PCr时,模板加多少?谢谢
13楼2009-04-21 19:36:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by x8q4h11 at 2009-4-21 19:36:

你好,我想问一下你用PCR回收产物做PCr时,模板加多少?谢谢

我加2ul
14楼2009-04-23 12:37:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 亦木水 at 2009-4-23 12:37:


我加2ul

谢谢。还想问一下,你是使用50微升体系,直接加2微升回收产物做模板吗?不用稀释吗?
15楼2009-04-23 21:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by x8q4h11 at 2009-4-23 21:26:

谢谢。还想问一下,你是使用50微升体系,直接加2微升回收产物做模板吗?不用稀释吗?

回收的产物浓度不高的啊,我的体系是25ul的
16楼2009-04-24 21:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 亦木水 at 2009-4-24 21:14:


回收的产物浓度不高的啊,我的体系是25ul的

谢谢
17楼2009-04-25 10:40:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 亦木水 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂 +5 zhn03 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:58 by peike
[考研] 275求调剂 +3 Micky11223 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:32 by barlinike
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +3 小鱼爱有机 2026-03-25 3/150 2026-03-25 20:13 by qingfeng258
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 296求调剂 +4 汪!?! 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪!?!
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见