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大孔树脂纯化黄酮含量的问题 已有3人参与
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| 本人刚刚接触天然药物的分离纯化，想用大孔树脂最佳醇浓度洗下含量最高的黄酮那部分作为药理模型的使用药物。我将荨麻浸膏用少量水超声溶解后，配成6mg/ml的浓度上样。开始水洗体积为7BV，上样流速为4ml/ml，醇洗脱体积为5BV、洗脱流速4ml/min。收集纯化后的流出液，经浓缩、减压干燥后，以紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量。问题来了！我水洗完后，以芦丁味标准品，测定水洗部分的黄酮含量为2%，接着用15%乙醇继续洗脱，测得这部分黄酮含量为31%；再用30%醇洗脱，含量为39.25%；50%乙醇洗脱，黄酮含量为30.52%。这个结果和我师姐做过的50%醇洗脱的黄酮含量能达到52%完全版不相符啊，15%醇和30%醇洗的黄酮怎么比50%的还多的呢？？？这点哪位大神请给我解释以下，是我师姐的结果不对，还是我上柱子上的有问题呢？@lifeliuyan |
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 黄酮 |
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2楼2018-02-08 08:34:07
wang422jian
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3楼2018-02-09 08:07:19
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什么意思？为什么加一块？我得意思是想找出能洗出黄酮含量最高的那部分所对应的醇浓度，每个醇浓度洗下的部分旋蒸后测的这部分含量，得出的百分比。就是想得到百分比最高的那部分 发自小木虫Android客户端 |
4楼2018-02-11 19:27:32
czzlnkar
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【答案】应助回帖
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问题出在几个方面： 1是算错了，比如定容的容量瓶记错了或者吸光度记错数了等等非操作手法问题……2是你师姐那部分提取不完全不知道回收率是不是已经过了……3是你用的药材和她的不是一批造成含量不同……4是本身此方法重现性差，过柱子的时候手法因人而异或乙醇没被水洗干净等等造成做定量本身就比较不易重现 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2018-02-11 23:02:04
6楼2018-02-12 09:22:48
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您说的过载问题我似懂非懂，如何判断是否过载呢？如果过载会造成什么样的数据影响呢？请指教。我还发现用水洗下来的东西颜色和膏基本是一样的，这是不是说明了有一部分浸膏没有吸附就被直接冲下来了呢？或许是否跟我上样之后关闭下端阀门静置了20分钟就用水洗有关呢？是否应该打开阀门让它以最慢的速度走，不能关闭静置？ 发自小木虫Android客户端 |
7楼2018-02-18 00:25:08
8楼2018-03-13 16:11:32
【答案】应助回帖
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1.首先你的药材如果和你师姐的不一样，那么结果不具有可比性。 2.从你回复其他人的内容可以看出你的柱子可能过载了。 3.有人说你的黄铜量超过100%，那是他们理解错了。你说的应该是每个梯度溶剂洗脱物中黄铜的占比，这个占比是可以在0-100%（当然很难达到哈哈）的。 4.你最好重复做一次，洗脱之前，充分吸附（大孔树脂一般不会死吸附），然后梯度洗脱（也不要按多少倍柱体积了），直接洗到洗脱液为无色时，换用下一个梯度洗脱。然后收集每个梯度洗脱液，旋干，制备成粉末后测量黄铜含量，或者浓缩成浸膏（不建议，浸膏水分无能统一，换算不便），或者浓缩后溶于测量时所用的溶液（稀释后测量，结果须归一到每个梯度洗脱物中黄酮的量占原药材中黄酮总量的百分比，这里面所有梯度计算的总和是不能大于100%的）。祝你好运。 |
9楼2018-03-14 17:05:05