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tz607222

铁虫 (小有名气)

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[求助] 大孔树脂纯化黄酮含量的问题已有3人参与

本人刚刚接触天然药物的分离纯化，想用大孔树脂最佳醇浓度洗下含量最高的黄酮那部分作为药理模型的使用药物。我将荨麻浸膏用少量水超声溶解后，配成6mg/ml的浓度上样。开始水洗体积为7BV，上样流速为4ml/ml，醇洗脱体积为5BV、洗脱流速4ml/min。收集纯化后的流出液，经浓缩、减压干燥后，以紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量。问题来了！我水洗完后，以芦丁味标准品，测定水洗部分的黄酮含量为2%，接着用15%乙醇继续洗脱，测得这部分黄酮含量为31%；再用30%醇洗脱，含量为39.25%；50%乙醇洗脱，黄酮含量为30.52%。这个结果和我师姐做过的50%醇洗脱的黄酮含量能达到52%完全版不相符啊，15%醇和30%醇洗的黄酮怎么比50%的还多的呢？？？这点哪位大神请给我解释以下，是我师姐的结果不对，还是我上柱子上的有问题呢？@lifeliuyan

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黄酮

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1楼 2018-02-07 19:26:09

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不经意的创造

金虫 (小有名气)

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专业: 肿瘤免疫

【答案】应助回帖

1.首先你的药材如果和你师姐的不一样，那么结果不具有可比性。
2.从你回复其他人的内容可以看出你的柱子可能过载了。
3.有人说你的黄铜量超过100%，那是他们理解错了。你说的应该是每个梯度溶剂洗脱物中黄铜的占比，这个占比是可以在0-100%（当然很难达到哈哈）的。
4.你最好重复做一次，洗脱之前，充分吸附（大孔树脂一般不会死吸附），然后梯度洗脱（也不要按多少倍柱体积了），直接洗到洗脱液为无色时，换用下一个梯度洗脱。然后收集每个梯度洗脱液，旋干，制备成粉末后测量黄铜含量，或者浓缩成浸膏（不建议，浸膏水分无能统一，换算不便），或者浓缩后溶于测量时所用的溶液（稀释后测量，结果须归一到每个梯度洗脱物中黄酮的量占原药材中黄酮总量的百分比，这里面所有梯度计算的总和是不能大于100%的）。祝你好运。