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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 找不到合适的内参怎么办
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18288973959

新虫 (初入文坛)

[求助] 找不到合适的内参怎么办已有1人参与

最近用trizol提总RNA，提完后，用仪器检测RNA浓度与纯度（纯度A260/A280大约在1.9~2.1），然后将全部RNA配成相同浓度，接着进行逆转，做qPCR。很奇怪，在这种情况下各组内参基因跑出了差距很大的CT值，跨度7-13不等，理论上来说，不应该啊。正常对照组与实验组内参CT总是有比较大的差距，怎么办？前前后后，我已经提了两次RNA，用了不同的逆转录试剂盒，最终跑出来的趋势基本一致：CT内参＜CT实验组。这么多内参基因都不稳定……都不想再摸索了。请问可以用总RNA量作为对照吗？（就是把个样品RNA配成相同浓度后逆转）@biostar2009
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1楼2018-01-22 12:23:48
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

问一下，你确定搞明白qPCR原理了吗？
比如为什么要∆∆ct？具体指什么

我觉得你搞明白这个，可能你的问题就自解了
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-01-29 11:45:19
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anona

铜虫 (初入文坛)
楼主找到解决办法了么，遇到同样问题，actin 和GADPH 都一样
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2楼2018-01-28 20:32:10
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zyyz365

铜虫 (小有名气)
我也想知道

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3楼2018-01-28 23:47:12
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大文盲

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 18288973959 at 2018-01-22 12:23:48
最近用trizol提总RNA，提完后，用仪器检测RNA浓度与纯度（纯度A260/A280大约在1.9~2.1），然后将全部RNA配成相同浓度，接着进行逆转，做qPCR。很奇怪，在这种情况下各组内参基因跑出了差距很大的CT值，跨度7-13不等 ...

楼主解决了吗，我遇到同样问题很苦恼，QQ469024841，想向您有偿咨询，跪谢

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5楼2018-09-12 12:09:34
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