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lauren180木虫 (著名写手)
小木虫挖井人
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求助：革兰氏阳性菌感受态如何制备？
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| 各位大侠，链球菌（革兰氏阳性菌），而且还有荚膜，感受态如何制备呀？原生之体转化效果怎样？有没有菌体转化的方案呀？ |
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2楼2009-03-05 11:49:36
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sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与讨论~欢迎常来~ 3-6 09:15
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1.准备工作：配制1mol/L的氯化钙并将其过滤和LB培养基；高压纯甘油和50毫升的离心管。 2.制备感受态细胞： （1）将保存的相应的感受态细胞的菌液画板与37度培养箱中培养十二小时。 （2）挑単菌落于新鲜的LB培养基中，于37度摇床中摇9-10小时，注意不要摇过！ （3）按1%取上述菌液于新鲜的LB培养基中，于37度摇床中摇2-3小时至OD达0.3-0.6. （4）将50mL离心管和菌液冰裕30min后将菌液加入离心管中。 （5）于4000rpm离心15min，弃上清。 （6）按初始培养液的10%的冰浴的氯化钙重悬沉淀，冰浴30min. （7）于4000rpm离心15min，弃上清。 （8）按初始培养液的4%的冰浴的氯化钙重悬沉淀并加甘油至10%，分装于1.5mLep管中，每管100uL。注意分装时要在冰上操作！ from:http://www.biomsn.com/html/97/t-11397.html |
3楼2009-03-05 14:37:48
lauren180
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5楼2009-03-05 22:54:36
lauren180
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7楼2009-03-06 14:30:45
rszhang
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8楼2009-03-06 20:56:21