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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：革兰氏阳性菌感受态如何制备？
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

[交流] 求助：革兰氏阳性菌感受态如何制备？

各位大侠，链球菌（革兰氏阳性菌），而且还有荚膜，感受态如何制备呀？原生之体转化效果怎样？有没有菌体转化的方案呀？
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细推物理须行乐。
1楼 2009-03-04 11:24:37
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lauren180

木虫 (著名写手)
2楼2009-03-05 11:49:36
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wildboy

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与讨论~欢迎常来~ 3-6 09:15
1.准备工作：配制1mol/L的氯化钙并将其过滤和LB培养基；高压纯甘油和50毫升的离心管。
2.制备感受态细胞：
（1）将保存的相应的感受态细胞的菌液画板与37度培养箱中培养十二小时。
（2）挑単菌落于新鲜的LB培养基中，于37度摇床中摇9-10小时，注意不要摇过！
（3）按1%取上述菌液于新鲜的LB培养基中，于37度摇床中摇2-3小时至OD达0.3-0.6.
（4）将50mL离心管和菌液冰裕30min后将菌液加入离心管中。
（5）于4000rpm离心15min，弃上清。
（6）按初始培养液的10%的冰浴的氯化钙重悬沉淀，冰浴30min.
（7）于4000rpm离心15min，弃上清。
（8）按初始培养液的4%的冰浴的氯化钙重悬沉淀并加甘油至10%，分装于1.5mLep管中，每管100uL。注意分装时要在冰上操作！
from:http://www.biomsn.com/html/97/t-11397.html
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3楼2009-03-05 14:37:48
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
革兰氏阳性菌 和大肠即阴性一样吗？有些置疑
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细推物理须行乐。
4楼2009-03-05 22:01:37
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
我也想知道，能否提供一下，一般阳性菌电转吧
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帮助虫友，提升自己
5楼2009-03-05 22:54:36
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
我看了看，电转 原生质体转化多一些
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细推物理须行乐。
6楼2009-03-06 13:47:02
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dochy

木虫 (小有名气)
阳性菌没法用化学转化方法，一般都是用电转化，链球菌没有做过，不过以前做过枯草芽孢杆菌，枯草是在菌体生长的某一个阶段会比较容易转化，一般在这个阶段收集菌体进行洗涤之后进行电转化。
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7楼2009-03-06 14:30:45
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rszhang

铁杆木虫 (正式写手)
枯草芽孢杆菌如何化学转化？
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8楼2009-03-06 20:56:21
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