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无与伦比1314

新虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒 已有3人参与

我的载体4000bp,目的片段2000bp,用的是无缝克隆,按理说重组质粒是6000bp,但跑胶结果显示只有3000bp,不知道是什么原因

@youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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前行的璐

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是没重组上,可以酶切或者pcr鉴定
2楼2018-01-14 15:50:23
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒跑电泳大小不准确的,有条带只能说明提出质粒了,建议酶切看大小。
总会出现一个温柔的人,让你变得温暖,然后默默离开。
3楼2018-01-15 08:55:05
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无与伦比1314

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿门阿前1991 at 2018-01-15 08:55:05
质粒跑电泳大小不准确的,有条带只能说明提出质粒了,建议酶切看大小。

但是用了无缝克隆后,没有酶切位点了

发自小木虫Android客户端
4楼2018-01-15 10:29:30
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 无与伦比1314 at 2018-01-15 10:29:30
但是用了无缝克隆后,没有酶切位点了
...

用载体上其它的酶切位点也可以的,因为不酶切的话,是超螺旋,大小会小一半。
总会出现一个温柔的人,让你变得温暖,然后默默离开。
5楼2018-01-15 10:53:52
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Korea??

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 无与伦比1314 at 2018-01-15 10:29:30
但是用了无缝克隆后,没有酶切位点了
...

无缝连接就不能酶切了么?那么如何检验?

发自小木虫IOS客户端
6楼2018-01-16 14:32:04
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一,提取质粒选用载体序列上的酶切位点,单双酶切都可,算出片段大小,跑胶验证。
二,选取载体上游序列正向引物,与目的片段序列中的反向序列进行片段PCR,验证是否插入成功。
三,直接拿去测序。
7楼2018-01-16 15:24:01
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xinxinjin

银虫 (知名作家)

你现在实验已经做完了吧

发自小木虫Android客户端
8楼2019-05-15 11:06:56
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