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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 重组质粒
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无与伦比1314

新虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒 已有3人参与

我的载体4000bp，目的片段2000bp，用的是无缝克隆，按理说重组质粒是6000bp，但跑胶结果显示只有3000bp，不知道是什么原因

@youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-01-14 13:06:26
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前行的璐

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是没重组上，可以酶切或者pcr鉴定
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2楼2018-01-14 15:50:23
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒跑电泳大小不准确的，有条带只能说明提出质粒了，建议酶切看大小。
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总会出现一个温柔的人，让你变得温暖，然后默默离开。
3楼2018-01-15 08:55:05
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无与伦比1314

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿门阿前1991 at 2018-01-15 08:55:05
质粒跑电泳大小不准确的，有条带只能说明提出质粒了，建议酶切看大小。

但是用了无缝克隆后，没有酶切位点了

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4楼2018-01-15 10:29:30
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 无与伦比1314 at 2018-01-15 10:29:30
但是用了无缝克隆后，没有酶切位点了
...

用载体上其它的酶切位点也可以的，因为不酶切的话，是超螺旋，大小会小一半。
赞一下(1人) 回复此楼
总会出现一个温柔的人，让你变得温暖，然后默默离开。
5楼2018-01-15 10:53:52
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Korea??

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 无与伦比1314 at 2018-01-15 10:29:30
但是用了无缝克隆后，没有酶切位点了
...

无缝连接就不能酶切了么？那么如何检验？

发自小木虫IOS客户端
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6楼2018-01-16 14:32:04
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一，提取质粒选用载体序列上的酶切位点，单双酶切都可，算出片段大小，跑胶验证。
二，选取载体上游序列正向引物，与目的片段序列中的反向序列进行片段PCR，验证是否插入成功。
三，直接拿去测序。
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7楼2018-01-16 15:24:01
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xinxinjin

银虫 (职业作家)
你现在实验已经做完了吧

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8楼2019-05-15 11:06:56
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