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分子生物学、蛋白表达 已有3人参与
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求助各位大神，最近用BL21表达pET系列重组质粒，用溶菌酶破碎细菌，但是离心之后，SDS-PAGE电泳结果显示上清没有蛋白条带，沉淀里有，课题组的师兄师姐的又没有问题，这是什么情况啊？感谢各位的指点  |
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hyperwaters
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- 专业: 生物大分子结构与功能
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首先，单纯用溶菌酶来裂解，效果很差的，所以你先要确定cell pellets真的裂解了？相差显微镜或结晶紫染色看看裂解效果吧，如果裂解效果很差，你目的蛋白可溶不可溶还另议。另外，减少诱导剂浓度 温度 加增渗剂 葡萄糖都可能改善可溶性。再次，这些措施都不行的话，重新构建表达系统如融合标签gst,mbp，sumo 和分子伴侣 折叠酶促溶. 发自小木虫Android客户端 |
7楼2018-01-13 10:37:44
匿名
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2楼2018-01-12 17:30:44
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3楼2018-01-12 18:10:05
4楼2018-01-12 20:35:27