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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接载体酶切位点 SnaBI 和NotI连接效率
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

[求助] 连接载体酶切位点 SnaBI 和NotI连接效率 已有2人参与

如题，准备引入 SnaB I 和 Not I 两个酶切位点，并采用takarra的QuickCut限制酶进行酶切，之后连接至ppic9k。

想请问做过的前辈，SnaB I 是平末端，Not I 是粘性末端，连接效率高不？实在不行可否先酶连SnaB I，之后用PCR纯化试剂盒纯化完毕再进行Not I端酶连？
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1楼 2018-01-01 19:19:08
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
快来小伙伴答题呀，送金币了
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2楼2018-01-01 19:27:00
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢前辈 2018-01-02 19:13:52
为什么不采用infusion或者Gibson来做 感觉会方便许多 平末端的连接一直都低效率的 用quickligase可能会效率好些
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3楼2018-01-02 11:18:14
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渊博震天

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Yeast Display

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3楼: Originally posted by fjtony163 at 2018-01-02 11:18:14
为什么不采用infusion或者Gibson来做 感觉会方便许多 平末端的连接一直都低效率的 用quickligase可能会效率好些

无缝克隆连接表达载体之后再导入DH5a后提取质粒再接着做吗？

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4楼2018-01-02 19:13:19
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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引用回帖:
4楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-01-02 19:13:19
无缝克隆连接表达载体之后再导入DH5a后提取质粒再接着做吗？
...

对的 我猜你说的DH5a是某种感受态细胞
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5楼2018-01-03 05:06:08
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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5楼: Originally posted by fjtony163 at 2018-01-03 05:06:08
对的 我猜你说的DH5a是某种感受态细胞...

是的

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6楼2018-01-03 08:01:24
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

朋友，我们可以换一下质粒吗？我现在需要pPIC9K，谢谢你。
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付出定有回报
7楼2018-01-16 11:01:21
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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直接加同源臂用无缝克隆做了。

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8楼2018-04-07 13:58:29
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