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渊博震天

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Yeast Display

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[求助] 连接载体酶切位点 SnaBI 和NotI连接效率 已有2人参与

如题,准备引入 SnaB I 和 Not I 两个酶切位点,并采用takarra的QuickCut限制酶进行酶切,之后连接至ppic9k。

想请问做过的前辈,SnaB I 是平末端,Not I 是粘性末端,连接效率高不?实在不行可否先酶连SnaB I,之后用PCR纯化试剂盒纯化完毕再进行Not I端酶连?
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渊博震天

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快来小伙伴答题呀,送金币了
2楼2018-01-01 19:27:00
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fjtony163

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米米

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
渊博震天: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢前辈 2018-01-02 19:13:52
为什么不采用infusion或者Gibson来做 感觉会方便许多 平末端的连接一直都低效率的 用quickligase可能会效率好些
3楼2018-01-02 11:18:14
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渊博震天

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3楼: Originally posted by fjtony163 at 2018-01-02 11:18:14
为什么不采用infusion或者Gibson来做 感觉会方便许多 平末端的连接一直都低效率的 用quickligase可能会效率好些

无缝克隆连接表达载体之后再导入DH5a后提取质粒再接着做吗?

发自小木虫Android客户端
4楼2018-01-02 19:13:19
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fjtony163

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引用回帖:
4楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-01-02 19:13:19
无缝克隆连接表达载体之后再导入DH5a后提取质粒再接着做吗?
...

对的 我猜你说的DH5a是某种感受态细胞
5楼2018-01-03 05:06:08
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渊博震天

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引用回帖:
5楼: Originally posted by fjtony163 at 2018-01-03 05:06:08
对的 我猜你说的DH5a是某种感受态细胞...

是的

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6楼2018-01-03 08:01:24
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

朋友,我们可以换一下质粒吗?我现在需要pPIC9K,谢谢你。
付出定有回报
7楼2018-01-16 11:01:21
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渊博震天

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直接加同源臂用无缝克隆做了。

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8楼2018-04-07 13:58:29
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