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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增
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1768624049

新虫 (正式写手)

[交流] PCR扩增 已有2人参与

PCR扩增的片段不对，但引物设计没问题，我该怎么办啊，

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1楼 2017-12-30 12:53:49
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书中日月长

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果有目的基因的序列，可以尝试增加引物的长度，增加引物的特异性。希望对你有帮助
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2楼2017-12-30 16:09:21
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1768624049

新虫 (正式写手)
谢谢

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3楼2017-12-30 23:26:33
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dearwoniu

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我认为你的引物设计可能有问题。提几个建议，参考一下。
1、设计模板的问题。是真核生物还是原核生物，用的是全基因组序列还是cds序列设计，是否跨内含子。
2、是否能够排除同源序列的干扰。
3、如果以上都没有问题，建议你进行温度梯度，或者更换位置重新设计引物。
4、更换pcr的buffer，有些公司的buffer为了提高扩增效率，组分调整的比较厉害，可能会产生非特异产物。
5、用甜菜碱或者dmso
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4楼2018-01-03 10:04:22
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1768624049

新虫 (正式写手)
谢谢你

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5楼2018-01-03 10:30:58
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1768624049

新虫 (正式写手)
因为引物是老师设计的，并且看过了没有问题，我们实验室的都是PCR扩增的片段不对或者是切不开，我觉得可能是pfu的buffer问题

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6楼2018-01-03 10:32:25
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