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新虫 (正式写手)

[交流] PCR扩增 已有2人参与

PCR扩增的片段不对,但引物设计没问题,我该怎么办啊,

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书中日月长

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果有目的基因的序列,可以尝试增加引物的长度,增加引物的特异性。希望对你有帮助
2楼2017-12-30 16:09:21
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1768624049

新虫 (正式写手)

3楼2017-12-30 23:26:33
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dearwoniu

金虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我认为你的引物设计可能有问题。提几个建议,参考一下。
1、设计模板的问题。是真核生物还是原核生物,用的是全基因组序列还是cds序列设计,是否跨内含子。
2、是否能够排除同源序列的干扰。
3、如果以上都没有问题,建议你进行温度梯度,或者更换位置重新设计引物。
4、更换pcr的buffer,有些公司的buffer为了提高扩增效率,组分调整的比较厉害,可能会产生非特异产物。
5、用甜菜碱或者dmso
4楼2018-01-03 10:04:22
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1768624049

新虫 (正式写手)

5楼2018-01-03 10:30:58
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1768624049

新虫 (正式写手)

因为引物是老师设计的,并且看过了没有问题,我们实验室的都是PCR扩增的片段不对或者是切不开,我觉得可能是pfu的buffer问题

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6楼2018-01-03 10:32:25
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