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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母重组蛋白纯化问题
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MeiPD

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母重组蛋白纯化问题 已有3人参与

用酵母做重组，表达融合蛋白约9.7K，属于分泌型表达，含His-tag，取上清10倍浓缩后进行Tri-sds-page电泳跑胶，出现目地条带，且看起来表达量还可以。上清10ml用PBS透析后上Ni柱，跑胶，结果穿透液，洗涤液（咪唑10mM）和洗脱液（咪唑250mM）均没有目地蛋白，后来在样品和洗涤，洗脱液中加了4M尿素，跑胶发现在穿透液，洗涤液中隐约出现了目地蛋白条带，但量很低，这样应该怎么调整纯化条件呢？

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1楼 2017-12-18 20:41:58
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bbass533

禁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-12-31 23:01:51
本帖内容被屏蔽
2楼2017-12-19 11:15:25
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MeiPD

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbass533 at 2017-12-19 11:15:25
我们实验室之前也遇到过这个问题，后来不再用镍柱，换的离子柱吧好像（别人做的，我不是很清楚），后来蛋白就纯化回来了。我们那蛋白也是有his标签的，根本挂不上镍柱，不清楚什么原因。

好的，多谢！

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3楼2017-12-19 16:42:39
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renyanbin

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主这个问题解决了吗？目前遇到同样的问题，师兄说是过度糖基化修饰导致的，还没有找到解决的办法。
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4楼2017-12-31 10:58:52
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郭高杰

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，问题解决了吗，现在也遇到这问题了
赞一下 回复此楼
5楼2018-01-04 19:16:27
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