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最蠢的小白

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问pYes2质粒转化到酵母菌中后,在筛选培养时是不是需要半乳糖诱导? 已有3人参与

请问各位大佬,我用BY4741转化了pYES2质粒后,用Ura minus培养基培养,加了葡萄糖,大概3天以后会有单菌落出现,但是菌液鉴定时没有条带出现,是不是我没有用半乳糖诱导的原因?出现的单菌落是不是因为时间太长了也不是真正的克隆?

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大海的孩子

新虫 (初入文坛)

你好,我最近也在做酵母表达,能否共享你的BY4741野生型酵母菌株,定当不胜感激!

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3楼2017-12-23 20:04:06
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heart想名字

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

跟半乳糖诱导没关系,只要质粒转进去了就能扩出东西来,可以破菌之后再做菌液pcr验证

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2楼2017-12-21 20:48:33
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一叶知秋365

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议提一下酵母质粒,然后PCR试试。我之前也是菌液没P出来,提质粒后P出来了。

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4楼2017-12-24 00:26:51
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baolingmu123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接PCR是出不来结果的,需要沸水注意下酵母,才能扩出来目的条带。。
5楼2018-01-25 10:34:14
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