24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1880  |  回复: 8

最蠢的小白

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问pYes2质粒转化到酵母菌中后,在筛选培养时是不是需要半乳糖诱导? 已有3人参与

请问各位大佬,我用BY4741转化了pYES2质粒后,用Ura minus培养基培养,加了葡萄糖,大概3天以后会有单菌落出现,但是菌液鉴定时没有条带出现,是不是我没有用半乳糖诱导的原因?出现的单菌落是不是因为时间太长了也不是真正的克隆?

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heart想名字

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

跟半乳糖诱导没关系,只要质粒转进去了就能扩出东西来,可以破菌之后再做菌液pcr验证

发自小木虫Android客户端
2楼2017-12-21 20:48:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海的孩子

新虫 (初入文坛)

你好,我最近也在做酵母表达,能否共享你的BY4741野生型酵母菌株,定当不胜感激!

发自小木虫Android客户端
3楼2017-12-23 20:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一叶知秋365

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议提一下酵母质粒,然后PCR试试。我之前也是菌液没P出来,提质粒后P出来了。

发自小木虫Android客户端
4楼2017-12-24 00:26:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baolingmu123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接PCR是出不来结果的,需要沸水注意下酵母,才能扩出来目的条带。。
5楼2018-01-25 10:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最蠢的小白

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by heart想名字 at 2017-12-21 20:48:33
跟半乳糖诱导没关系,只要质粒转进去了就能扩出东西来,可以破菌之后再做菌液pcr验证

好的谢谢!的确是我的酵母壁没有破开,所以没有条带。谢谢!

发自小木虫Android客户端
6楼2018-03-07 09:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最蠢的小白

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 一叶知秋365 at 2017-12-24 00:26:51
建议提一下酵母质粒,然后PCR试试。我之前也是菌液没P出来,提质粒后P出来了。

对对对,我就是提了一下质粒然后就有条带了,浪费了那么多时间TAT。非常感谢!

发自小木虫Android客户端
7楼2018-03-07 09:02:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最蠢的小白

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by baolingmu123 at 2018-01-25 10:34:14
直接PCR是出不来结果的,需要沸水注意下酵母,才能扩出来目的条带。。

嗯嗯谢谢,我煮过以后还是没有破开壁,可能是我煮的时间不够,后来提了质粒就有条带了,谢谢!

发自小木虫Android客户端
8楼2018-03-07 09:03:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baolingmu123

金虫 (小有名气)

你那个需要把酵母细胞破壁,然后才能pcr出结果

发自小木虫Android客户端
9楼2018-05-20 23:18:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 最蠢的小白 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 这年头没有找到涵评专家,还有中面上的可能吗 +13 dd921ww 2026-05-12 16/800 2026-05-17 12:38 by 于轩
[基金申请] 重磅!青年科学基金项目(C类)资助增幅预计超过50% +7 水和泥不是水泥 2026-05-13 9/450 2026-05-17 08:28 by soxiaomucong
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 v9tggjlwd0 2026-05-15 4/200 2026-05-17 08:06 by 11n4dfd8yn
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 xx7gd5zq4e 2026-05-15 7/350 2026-05-17 07:58 by 11n4dfd8yn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 cjf4bx70cj 2026-05-14 7/350 2026-05-17 06:55 by 11n4dfd8yn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k37jurhrau 2026-05-16 4/200 2026-05-17 01:35 by ue3ir18jc3
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ky2p12rrjj 2026-05-15 5/250 2026-05-17 01:10 by ue3ir18jc3
[基金申请] 精华III评审感受-评审感受-评审感受 +16 ferrarichen 2026-05-11 20/1000 2026-05-17 01:10 by 南开小綦
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ky2p12rrjj 2026-05-15 3/150 2026-05-17 00:55 by ue3ir18jc3
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 x0mp7owy2b 2026-05-15 4/200 2026-05-17 00:35 by ue3ir18jc3
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 x0mp7owy2b 2026-05-15 4/200 2026-05-17 00:30 by ue3ir18jc3
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 x0mp7owy2b 2026-05-15 4/200 2026-05-17 00:25 by ue3ir18jc3
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 l7k6xnh0yc 2026-05-14 6/300 2026-05-16 22:55 by ue3ir18jc3
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 x0mp7owy2b 2026-05-15 4/200 2026-05-16 17:45 by j6b2pdz07o
[有机交流] 求有机合成大神指点三硫酸乙烯酯(CAS:2793408-99-6)的合成路线 30+3 Leekmid 2026-05-13 10/500 2026-05-16 16:37 by czyzsu
[有机交流] 如何实现卤原子转化 +3 BT20230424 2026-05-15 5/250 2026-05-16 16:20 by czyzsu
[硕博家园] 考博自荐 +3 科研狗111 2026-05-13 4/200 2026-05-16 11:45 by 科研狗111
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 l7k6xnh0yc 2026-05-14 6/300 2026-05-16 11:29 by h3oerqvkv9
[考博] 西南大学考核制博士 +4 lijunjie84 2026-05-11 7/350 2026-05-15 23:20 by 同仁堂教主
[论文投稿] 求助大佬sci投稿哪个好中 +3 江沅188 2026-05-12 4/200 2026-05-13 14:35 by 江沅188
信息提示
请填处理意见