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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 请问pYes2质粒转化到酵母菌中后，在筛选培养时是不是需要半乳糖诱导？
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最蠢的小白

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问pYes2质粒转化到酵母菌中后，在筛选培养时是不是需要半乳糖诱导？ 已有3人参与

请问各位大佬，我用BY4741转化了pYES2质粒后，用Ura minus培养基培养，加了葡萄糖，大概3天以后会有单菌落出现，但是菌液鉴定时没有条带出现，是不是我没有用半乳糖诱导的原因？出现的单菌落是不是因为时间太长了也不是真正的克隆？

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1楼 2017-12-18 14:42:06
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heart想名字

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

跟半乳糖诱导没关系，只要质粒转进去了就能扩出东西来，可以破菌之后再做菌液pcr验证

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2楼2017-12-21 20:48:33
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大海的孩子

新虫 (初入文坛)
你好，我最近也在做酵母表达，能否共享你的BY4741野生型酵母菌株，定当不胜感激！

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3楼2017-12-23 20:04:06
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一叶知秋365

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议提一下酵母质粒，然后PCR试试。我之前也是菌液没P出来，提质粒后P出来了。

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4楼2017-12-24 00:26:51
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baolingmu123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接PCR是出不来结果的，需要沸水注意下酵母，才能扩出来目的条带。。
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5楼2018-01-25 10:34:14
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最蠢的小白

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by heart想名字 at 2017-12-21 20:48:33
跟半乳糖诱导没关系，只要质粒转进去了就能扩出东西来，可以破菌之后再做菌液pcr验证

好的谢谢！的确是我的酵母壁没有破开，所以没有条带。谢谢！

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6楼2018-03-07 09:01:35
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最蠢的小白

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 一叶知秋365 at 2017-12-24 00:26:51
建议提一下酵母质粒，然后PCR试试。我之前也是菌液没P出来，提质粒后P出来了。

对对对，我就是提了一下质粒然后就有条带了，浪费了那么多时间TAT。非常感谢！

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7楼2018-03-07 09:02:24
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最蠢的小白

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by baolingmu123 at 2018-01-25 10:34:14
直接PCR是出不来结果的，需要沸水注意下酵母，才能扩出来目的条带。。

嗯嗯谢谢，我煮过以后还是没有破开壁，可能是我煮的时间不够，后来提了质粒就有条带了，谢谢！

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8楼2018-03-07 09:03:13
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baolingmu123

金虫 (小有名气)
你那个需要把酵母细胞破壁，然后才能pcr出结果

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9楼2018-05-20 23:18:18
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