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sunnyhln

新虫 (正式写手)

[交流] 求助 已有4人参与

如果以植物组DNA为模版，通过普通PCR扩增克隆我需要的基因，需要模版DNA的浓度需要在什么范围？

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1楼 2017-12-18 10:29:13
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lenaimiao

金虫 (正式写手)
★
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1到2ul，10ng/ul到100pg/ul应该都可以，体积根据你的反应体系变化。第一次浓度尽量高点

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2楼2017-12-18 10:36:47
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sunnyhln

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lenaimiao at 2017-12-18 10:36:47
1到2ul，10ng/ul到100pg/ul应该都可以，体积根据你的反应体系变化。第一次浓度尽量高点

我每次提取的植物基因组DNA大约都是10ng/ul，跑琼脂糖凝胶电泳毫无条带，是不是浓度太低的原因啊？如果以它为模版克隆基因，是不是太低了浓度？不用几百ng/ul嘛？

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3楼2017-12-18 10:57:39
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bbass533

禁虫 (小有名气)
★
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4楼2017-12-18 12:50:41
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王平阳

金虫 (正式写手)
★
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提取的基因组浓度应该不会很低，一般几百纳克每微升到几微克每微升之间，电泳的时候上样量可以稍微多一点，至于PCR，只要基因组纯度差不多，50uL反应体系加20ng-200ng基因组DNA皆可
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没有做不到，只有想不到！
5楼2017-12-18 14:34:37
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lenaimiao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sunnyhln at 2017-12-18 10:57:39
我每次提取的植物基因组DNA大约都是10ng/ul，跑琼脂糖凝胶电泳毫无条带，是不是浓度太低的原因啊？如果以它为模版克隆基因，是不是太低了浓度？不用几百ng/ul嘛？
...

那锅就在引物了

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6楼2017-12-18 14:38:06
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sunnyhln

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王平阳 at 2017-12-18 14:34:37
提取的基因组浓度应该不会很低，一般几百纳克每微升到几微克每微升之间，电泳的时候上样量可以稍微多一点，至于PCR，只要基因组纯度差不多，50uL反应体系加20ng-200ng基因组DNA皆可

我是提取的莲雾果实的基因组DNA，每次都是含量特别低，最高的一次浓度是16ng/ul，跑电泳看不到条带，是不是浓度太低的原因？是否可以作为模版进行基因克隆呢？

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7楼2017-12-18 16:36:53
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王平阳

金虫 (正式写手)
★
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7楼: Originally posted by sunnyhln at 2017-12-18 16:36:53
我是提取的莲雾果实的基因组DNA，每次都是含量特别低，最高的一次浓度是16ng/ul，跑电泳看不到条带，是不是浓度太低的原因？是否可以作为模版进行基因克隆呢？
...

你这么个浓度，基本可以看作没提出来，跑电泳不可能有条带的，做PCR模板也不行，再想办法提取高质量的基因组吧
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没有做不到，只有想不到！
8楼2017-12-18 17:01:20
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sunnyhln

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 王平阳 at 2017-12-18 17:01:20
你这么个浓度，基本可以看作没提出来，跑电泳不可能有条带的，做PCR模板也不行，再想办法提取高质量的基因组吧...

那浓度在什么范围没才能跑出条带，以及可以作为模版进行基因克隆

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9楼2017-12-18 17:31:22
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北京，北京

禁言 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼2018-01-06 09:26:53
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