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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 原核表达
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wanghuan2017

新虫 (初入文坛)

[交流] 原核表达 已有2人参与

最近在做原核表达，His标签，图中1号泳道是用IPTG诱导的没有添加目的基因的菌，2号是未诱导的目的菌A，3号是用IPTG诱导的目的菌A，4号是未诱导的目的菌B，5号是诱导的目的菌B，6号是诱导的阳性对照。和对照相比，3,5明显有一条很粗的带，但是western检测的时候只杂出来了阳性对照，自己的没有杂出来，是蛋白没有诱导出来吗？那考染的那两条很粗的带是什么？还是说蛋白表达了但是his标签丢失了？求各位大神给点意见，谢谢。

原核表达


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1楼 2017-12-16 15:57:39
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小牧童嘻嘻

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是表达了，western做的有问题吗？哪一步都会影响结果
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wanghuan2017
如果不知道未来是什么样的，勇敢向前走就行了
3楼2017-12-29 09:50:21
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wanghuan2017

新虫 (初入文坛)
目的蛋白的大小是60多kDa

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2楼2017-12-16 15:58:35
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wanghuan2017

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小牧童嘻嘻 at 2017-12-29 09:50:21
是表达了，western做的有问题吗？哪一步都会影响结果

western没有问题，阳性对照杂出来了是黑色的条带，换上PET32a之后仍然是染色有带，杂交时显影时间长一点会有一点灰色的带
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4楼2018-01-22 17:14:24
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Cuic_Qing

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问 我也是做原核表达 IPTG诱导 应该用R-250还是G-250考染呢 我只通过条带深浅看表达情况 不测蛋白浓度 考染直接完了脱色 就结束了 应该选用哪个呢

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5楼2018-03-26 17:25:29
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