24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1290  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

keyanhrc

新虫 (小有名气)

[求助] DNA回收浓度低的问题求助

要构建质粒,对PCR产物 和 载体单酶切后 用天根通用型DNA回收试剂盒回收的,PCR产物1kb左右,载体5kb左右。  PCR产物回收浓度挺好的,240多ng/微升。但是 载体回收浓度就很低了,才20ng/微升。30微升的回收体积。不知问题出在哪里呀? 因为下一步还要再做一次单酶切,所以第一步酶切想要浓度高一点。请大侠指教!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rhjilio

新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-12-15 09:25:10
有两种方法!第一,逼迫质粒增加拷贝数,第二,用前一次甚至前几次洗脱液洗脱新的吸附柱!

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2017-12-14 21:45:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

rhjilio

新虫 (小有名气)

2楼2017-12-14 21:41:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keyanhrc

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by rhjilio at 2017-12-14 21:41:57
你这是分步酶切么?

是的,分两步单酶切。     50微升酶切体系,添加 2微克的DNA,5个管合一个柱子,30微升回收。
3楼2017-12-14 21:44:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keyanhrc

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by rhjilio at 2017-12-14 21:45:33
有两种方法!第一,逼迫质粒增加拷贝数,第二,用前一次甚至前几次洗脱液洗脱新的吸附柱!

哇,“用前一次甚至前几次洗脱液洗脱新的吸附柱”这个方法虽然不是我想要的,但很有创意!为你点赞!
      但我总想弄明白,为什么 总量相同的情况下,PCR产物和载体的回收浓度会差别这么大呢?
5楼2017-12-14 21:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见