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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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keyanhrc

新虫 (小有名气)

[求助] DNA回收浓度低的问题求助

要构建质粒,对PCR产物 和 载体单酶切后 用天根通用型DNA回收试剂盒回收的,PCR产物1kb左右,载体5kb左右。  PCR产物回收浓度挺好的,240多ng/微升。但是 载体回收浓度就很低了,才20ng/微升。30微升的回收体积。不知问题出在哪里呀? 因为下一步还要再做一次单酶切,所以第一步酶切想要浓度高一点。请大侠指教!
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rhjilio

新虫 (小有名气)

2楼2017-12-14 21:41:57
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keyanhrc

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by rhjilio at 2017-12-14 21:41:57
你这是分步酶切么?

是的,分两步单酶切。     50微升酶切体系,添加 2微克的DNA,5个管合一个柱子,30微升回收。
3楼2017-12-14 21:44:46
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rhjilio

新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-12-15 09:25:10
有两种方法!第一,逼迫质粒增加拷贝数,第二,用前一次甚至前几次洗脱液洗脱新的吸附柱!

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2017-12-14 21:45:33
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keyanhrc

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by rhjilio at 2017-12-14 21:45:33
有两种方法!第一,逼迫质粒增加拷贝数,第二,用前一次甚至前几次洗脱液洗脱新的吸附柱!

哇,“用前一次甚至前几次洗脱液洗脱新的吸附柱”这个方法虽然不是我想要的,但很有创意!为你点赞!
      但我总想弄明白,为什么 总量相同的情况下,PCR产物和载体的回收浓度会差别这么大呢?
5楼2017-12-14 21:52:43
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fenggeshj

新虫 (小有名气)

你的PCR产物是经过扩增后的,你的载体有进行扩增吗?载体本身就比产物少,怎么会回收一样的量呢?
6楼2017-12-28 15:19:27
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Korea??

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by keyanhrc at 2017-12-14 21:44:46
是的,分两步单酶切。     50微升酶切体系,添加 2微克的DNA,5个管合一个柱子,30微升回收。...

对哦,我单管P出来的相同的目的基因每管量都少的可怜,可以合柱的哦,我怎么没想到呢?

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7楼2018-01-16 22:02:53
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