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也许,明天

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE,marker带很奇怪,求大神帮忙分析~

4.9%浓缩胶,10%分离胶,用的marker是Thermo的26616/26610/26612(分别是10/7/6条带)。跑胶过程中会有一条线贯穿整块胶,一直向下移动,但是不会超过marker分子量最小的条带。电泳结束(溴酚蓝距胶底0.5cm)后结果如图,想知道跑胶过程中那条线是什么?marker条带为什么会少?(如果是因为胶浓度低,那么marker最小分子量的为什么会跑出来)……求解……

SDS-PAGE,marker带很奇怪,求大神帮忙分析~


SDS-PAGE,marker带很奇怪,求大神帮忙分析~-1


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慧轩ping

新虫 (正式写手)

这是什么蛋白呀?菌的?植物的?感觉浓度蛮大的,我之前做的,很弱

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2楼2017-12-02 09:34:46
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xueguangpu

至尊木虫 (职业作家)

可能是蛋白降解后的碎片,由于凝胶分辨率不够的原因,在电泳过程中移动速率一致。还有marker最小分子量的条带跑出来你是怎么确定的?也有可能是因为分离胶的分辨率不够,导致marker最下面的两个条带没有分开,跑成一条带了

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3楼2017-12-02 10:32:48
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729881345

新虫 (小有名气)

第一张图片最小的那条带不是特别明显,是分离胶浓度太大了,没有分开,第二张图的分离胶浓度太小了,跑出去了

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4楼2017-12-02 17:52:25
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也许,明天

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by xueguangpu at 2017-12-02 10:32:48
可能是蛋白降解后的碎片,由于凝胶分辨率不够的原因,在电泳过程中移动速率一致。还有marker最小分子量的条带跑出来你是怎么确定的?也有可能是因为分离胶的分辨率不够,导致marker最下面的两个条带没有分开,跑成一 ...

可是不太明白蛋白为什么会降解?15%分离胶(其他条件都一样)跑样品和marker都是正常的。
有两个是预染marker。其中彩色那个(26616)有两条带是其他颜色的,最小那条是绿色的10kDa的。

我查到的资料有说10%的胶能分辨最小的蛋白是20kDa的,但是thermo官网发的26616的图片有10%的胶是10条带都能跑出来~(附图,26616图片)

(话说新手不知道怎么送您金币呀,显示不是应助回帖呢~)

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5楼2017-12-04 22:02:03
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也许,明天

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by xueguangpu at 2017-12-02 10:32:48
可能是蛋白降解后的碎片,由于凝胶分辨率不够的原因,在电泳过程中移动速率一致。还有marker最小分子量的条带跑出来你是怎么确定的?也有可能是因为分离胶的分辨率不够,导致marker最下面的两个条带没有分开,跑成一 ...


SDS-PAGE,marker带很奇怪,求大神帮忙分析~-2



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6楼2017-12-04 22:02:56
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也许,明天

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 729881345 at 2017-12-02 17:52:25
第一张图片最小的那条带不是特别明显,是分离胶浓度太大了,没有分开,第二张图的分离胶浓度太小了,跑出去了

分离胶浓度是一样的哦
不过还是谢谢啦~

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7楼2017-12-04 22:04:10
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也许,明天

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 慧轩ping at 2017-12-02 09:34:46
这是什么蛋白呀?菌的?植物的?感觉浓度蛮大的,我之前做的,很弱

是一种抗体,主要是marker跑的很心塞呀

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8楼2017-12-04 22:07:55
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也许,明天

新虫 (小有名气)

9楼2017-12-05 23:38:18
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