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dulei木虫 (小有名气)
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[交流]
DNA去磷酸化（CIAP）后怎么纯化？
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我用的是CIAP碱性磷酸酶，照说明书的方法是这样的： 1、配制50uL反应体系。 2、37℃或50℃反应30分钟。 3、苯酚/氯仿/异戊醇（25 ：24 ：1）抽提2次。 4、氯仿/异戊醇（24 ：1）抽提1次。 5、添加5 μl的3 M NaOAC。 6、添加125 μl的（2.5倍量）冷乙醇，在-20℃下保冷30～60分钟。 7、离心分离回收沉淀，用200 μl的70％冷乙醇洗净后，减压干燥。 8、用20μl以下的TE Buffer溶解沉淀。 可是，第7步离心，不管怎么离心都得不到沉淀！！（我用13000r/min，离心20min）。 请问高手们都是怎么弄得？？希望给我个详细的步骤。谢谢！！ 另外，我想在37℃反应30分钟后，不用3—8步的方法进行纯化，而用纯化试剂盒（例如EZ-10 Spin Column DNA Gel Extraction Kit），可不可以？谢谢！！ |
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