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zhaomsy

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母分泌表达蛋白,没加任何标签的纯化方法 已有1人参与

用毕赤酵母做的分泌型蛋白表达,目的蛋白的分子大小为6.5kD,当初设计的时候没有加his标签,求助用什么纯化方法进行纯化比较好??因为需要尝蛋白所以需要纯化度好一点
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renyanbin

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaomsy at 2017-11-24 21:03:51
目前做到阴离子交换,目的蛋白pI=5,想请教一下如何根据pI选择缓冲液和洗脱液呢...

缓冲液pH离PI远一些就可以,比如pH7.0/8.0的Tris,结合Buffer盐浓度20-50mM就可以,洗脱液可以先直接100%洗脱看看有没有条带,再优化。
5楼2017-12-31 11:07:43
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细胞资源

新虫 (初入文坛)

2楼2017-11-21 14:55:58
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhaomsy: 金币+5 2017-11-24 21:01:35
没有标签,分泌表达的,纯化也简单,先硫酸铵盐析,这个既可以浓缩也可以粗纯,然后盐析后的蛋白溶解后,过疏水层析,进一步纯化,纯化后纯度不够了,在继续过离子交换的,阴阳离子试验下那个更合适,过完纯度890%应该没问题了,还想继续纯化,在过排阻层析,用葡聚糖G75柱子。没标签就用疏水,离子,排阻,盐析的方式纯化啊,也简单。
3楼2017-11-22 09:25:30
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zhaomsy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2017-11-22 09:25:30
没有标签,分泌表达的,纯化也简单,先硫酸铵盐析,这个既可以浓缩也可以粗纯,然后盐析后的蛋白溶解后,过疏水层析,进一步纯化,纯化后纯度不够了,在继续过离子交换的,阴阳离子试验下那个更合适,过完纯度890%应 ...

目前做到阴离子交换,目的蛋白pI=5,想请教一下如何根据pI选择缓冲液和洗脱液呢
4楼2017-11-24 21:03:51
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