应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 毕赤酵母分泌表达蛋白，没加任何标签的纯化方法
51/1返回列表
查看: 1090  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhaomsy

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母分泌表达蛋白，没加任何标签的纯化方法 已有1人参与

用毕赤酵母做的分泌型蛋白表达，目的蛋白的分子大小为6.5kD，当初设计的时候没有加his标签，求助用什么纯化方法进行纯化比较好？?因为需要尝蛋白所以需要纯化度好一点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-11-16 13:05:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhaomsy: 金币+5 2017-11-24 21:01:35
没有标签，分泌表达的，纯化也简单，先硫酸铵盐析，这个既可以浓缩也可以粗纯，然后盐析后的蛋白溶解后，过疏水层析，进一步纯化，纯化后纯度不够了，在继续过离子交换的，阴阳离子试验下那个更合适，过完纯度890%应该没问题了，还想继续纯化，在过排阻层析，用葡聚糖G75柱子。没标签就用疏水，离子，排阻，盐析的方式纯化啊，也简单。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2017-11-22 09:25:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

细胞资源

新虫 (初入文坛)
我也想知道

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2017-11-21 14:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaomsy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2017-11-22 09:25:30
没有标签，分泌表达的，纯化也简单，先硫酸铵盐析，这个既可以浓缩也可以粗纯，然后盐析后的蛋白溶解后，过疏水层析，进一步纯化，纯化后纯度不够了，在继续过离子交换的，阴阳离子试验下那个更合适，过完纯度890%应 ...

目前做到阴离子交换，目的蛋白pI=5，想请教一下如何根据pI选择缓冲液和洗脱液呢
赞一下 回复此楼
4楼2017-11-24 21:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyanbin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaomsy at 2017-11-24 21:03:51
目前做到阴离子交换，目的蛋白pI=5，想请教一下如何根据pI选择缓冲液和洗脱液呢...

缓冲液pH离PI远一些就可以，比如pH7.0/8.0的Tris，结合Buffer盐浓度20-50mM就可以，洗脱液可以先直接100%洗脱看看有没有条带，再优化。
赞一下 回复此楼
5楼2017-12-31 11:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +3 钢铁大炮 2026-03-24 3/150 2026-03-24 22:03 by bingxueer79
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[考研] 081700 调剂 267分 +9 迷人的哈哈 2026-03-23 9/450 2026-03-24 11:58 by 544594351
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭