应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 毕赤酵母分泌表达蛋白，没加任何标签的纯化方法
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 1105  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhaomsy

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母分泌表达蛋白，没加任何标签的纯化方法 已有1人参与

用毕赤酵母做的分泌型蛋白表达，目的蛋白的分子大小为6.5kD，当初设计的时候没有加his标签，求助用什么纯化方法进行纯化比较好？?因为需要尝蛋白所以需要纯化度好一点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-11-16 13:05:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

细胞资源

新虫 (初入文坛)
我也想知道

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2017-11-21 14:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhaomsy: 金币+5 2017-11-24 21:01:35
没有标签，分泌表达的，纯化也简单，先硫酸铵盐析，这个既可以浓缩也可以粗纯，然后盐析后的蛋白溶解后，过疏水层析，进一步纯化，纯化后纯度不够了，在继续过离子交换的，阴阳离子试验下那个更合适，过完纯度890%应该没问题了，还想继续纯化，在过排阻层析，用葡聚糖G75柱子。没标签就用疏水，离子，排阻，盐析的方式纯化啊，也简单。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2017-11-22 09:25:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaomsy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2017-11-22 09:25:30
没有标签，分泌表达的，纯化也简单，先硫酸铵盐析，这个既可以浓缩也可以粗纯，然后盐析后的蛋白溶解后，过疏水层析，进一步纯化，纯化后纯度不够了，在继续过离子交换的，阴阳离子试验下那个更合适，过完纯度890%应 ...

目前做到阴离子交换，目的蛋白pI=5，想请教一下如何根据pI选择缓冲液和洗脱液呢
赞一下 回复此楼
4楼2017-11-24 21:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renyanbin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaomsy at 2017-11-24 21:03:51
目前做到阴离子交换，目的蛋白pI=5，想请教一下如何根据pI选择缓冲液和洗脱液呢...

缓冲液pH离PI远一些就可以，比如pH7.0/8.0的Tris，结合Buffer盐浓度20-50mM就可以，洗脱液可以先直接100%洗脱看看有没有条带，再优化。
赞一下 回复此楼
5楼2017-12-31 11:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dellxiong

金虫 (初入文坛)
请问楼主 6.5KD的蛋白分泌表达，好做吗？
赞一下 回复此楼
6楼2018-01-04 09:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaomsy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dellxiong at 2018-01-04 09:58:39
请问楼主 6.5KD的蛋白分泌表达，好做吗？

还好吧，就是跑15%的sds胶不太好跑，这个也跟分泌的蛋白浓度有关，能表达出来。
赞一下 回复此楼
7楼2018-01-05 14:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江灵敏

新虫 (小有名气)
我的也是毕赤酵母分泌蛋白，不过是50KD，跑蛋白胶没有目的蛋白，可以帮忙分析一下吗，关系到研究生毕业，谢谢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2018-04-17 22:52:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaomsy 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 277跪求调剂 +5 1915668 2026-03-27 8/400 2026-03-27 19:53 by WYUMater
[考研] 求调剂 +6 张zz111 2026-03-27 7/350 2026-03-27 17:23 by 左的岸
[考博] 26申博 +3 加油冲啊！ 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 325求调剂 +5 李嘉图·S·路 2026-03-23 5/250 2026-03-27 00:42 by wxiongid
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂 +4 举个栗子oi 2026-03-24 5/250 2026-03-26 23:15 by 不吃魚的貓
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +9 Mr. Z 2026-03-25 9/450 2026-03-26 10:36 by baoball
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭