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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 外源基因通过RED重组至大肠杆菌染色体上进行目的蛋白高表达
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xiajungang

银虫 (正式写手)

[求助] 外源基因通过RED重组至大肠杆菌染色体上进行目的蛋白高表达 已有2人参与

试验背景：用大肠杆菌表达一目的蛋白，表达量较大，但是重组质粒不稳定，很容易在诱导表达后丢失，且丢失率很高。
试验内容：使用RED重组技术将外源基因和翻译元件一起重组至大肠杆菌染色体上，实现菌细胞边生长边表达目的蛋白。
请问：有哪位大侠有这方面经验吗？效果如何？请赐教。
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吃苦耐劳，勇于创新，乐观热情，积极向上！
1楼 2017-11-14 12:44:34
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play0joke

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

同问你的丢失率是如何评判得到的？如果实验目的是获取目的蛋白，你大可以多保存菌株，每次活化少量后扩大表达。
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思维随时转动，脚步永不停息
3楼2017-12-05 14:51:15
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呆呆戴戴

新虫 (著名写手)
丢失率是从何得来的

发自小木虫IOS客户端
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2楼2017-11-19 15:28:21
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
3楼正解，分装保存鉴定好的菌株，需要使用的时候就拿一支，简单省事。。。
真要通过重组整合到大肠杆菌基因组不是不可以，就是花费的时间精力不合算
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4楼2017-12-06 03:53:50
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

https://www.addgene.org/51625/,https://www.addgene.org/62225/,https://www.addgene.org/71541/ ,http://aem.asm.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=28646112，类似的挺多，这里几个是国内的研究，供参考，可以用这样的系统进行基因敲入。
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为什么
5楼2017-12-06 20:48:30
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