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xiajungang

银虫 (正式写手)

[求助] 外源基因通过RED重组至大肠杆菌染色体上进行目的蛋白高表达已有2人参与

试验背景:用大肠杆菌表达一目的蛋白,表达量较大,但是重组质粒不稳定,很容易在诱导表达后丢失,且丢失率很高。
试验内容:使用RED重组技术将外源基因和翻译元件一起重组至大肠杆菌染色体上,实现菌细胞边生长边表达目的蛋白。
请问:有哪位大侠有这方面经验吗?效果如何?请赐教。
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吃苦耐劳,勇于创新,乐观热情,积极向上!
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play0joke

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

同问你的丢失率是如何评判得到的?如果实验目的是获取目的蛋白,你大可以多保存菌株,每次活化少量后扩大表达。
思维随时转动,脚步永不停息
3楼2017-12-05 14:51:15
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呆呆戴戴

新虫 (著名写手)

2楼2017-11-19 15:28:21
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

3楼正解,分装保存鉴定好的菌株,需要使用的时候就拿一支,简单省事。。。
真要通过重组整合到大肠杆菌基因组不是不可以,就是花费的时间精力不合算
4楼2017-12-06 03:53:50
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

https://www.addgene.org/51625/,https://www.addgene.org/62225/,https://www.addgene.org/71541/ ,http://aem.asm.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=28646112,类似的挺多,这里几个是国内的研究,供参考,可以用这样的系统进行基因敲入。
为什么
5楼2017-12-06 20:48:30
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