应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 引物快到了，PCR用什么酶比较好？
131/2返回列表12下一页
查看: 806  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] 引物快到了，PCR用什么酶比较好？

请问大家，从放线菌基因组扩增几条800bp到1200bp、GC含量为70-75%的片段，用什么酶比较好？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-02-23 16:51:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦~ 2-23 21:46
这个GC比有点高
如果你不愿意用比较贵的酶，那么可以用Promega的GoTaq配合添加DMSO来做，这个是入门级的方法，当然比较折腾。或许可以试试看不加DMSO，然后把变性提高到95℃，1min试试
还有一些扩增能力比较强的酶，一般不用DMSO，如Invitrogen的白金Taq，这个会稍微贵一点
另外也有一些日系的产品会有很多针对性的酶，比如KOD FX，广告是卖得挺好的，不知道实际如何，这个不算太贵
不推荐使用Takara的酶，保证折腾死你……

如果不愁经费，那么用扩增能力强的酶，一次过做出来，不折腾
如果那个啥的话，经典的方法就是添加DMSO了，具体浓度需要自己摸
一般从2%加到15%左右，以1%为梯度摸
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2009-02-23 17:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muchong5577

金虫 (正式写手)
嗯  谢谢啦
回复此楼
3楼2009-02-23 17:12:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):欢迎常来`~ 2-23 21:46
放线菌DNA通常GC在70左右 第三位GC可达90 我没有看你的引物 一般比大肠的短几个就可以了
酶没有要求 普通Taq就可以 你是湖师的 我知道你是哪个组的了 哈哈
如果需要高保真 用PRimer 不过这个酶程序和普通Taq不一样 退火10s钟就行
赞一下(10人) 回复此楼
Bemühen Sie !
4楼2009-02-23 18:50:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
哦 一定要添加8-10%的DMSO 保证高GC模板变性时单链稳定 甘油也可以 不过我没试过 我一般就用DMSO
赞一下 回复此楼
Bemühen Sie !
5楼2009-02-23 18:52:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muchong5577

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by muchong5577 at 2009-2-23 17:12:
嗯  谢谢啦

你怎么知道我？
普通Taq+DMSO我去年做过，加DMSO的 ，你能否给我一个反应体系。
赞一下 回复此楼
6楼2009-02-23 19:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muchong5577

金虫 (正式写手)
Quote里的内容错啦
赞一下 回复此楼
7楼2009-02-23 19:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
可以先用扩增长序列的taq酶看看结果怎么样？如果因为gc含量高的话而结果不理想，再用DMSO一般不要超过10%不然特异性还是会降低的
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
8楼2009-02-23 20:09:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦~ 2-25 13:25
10* Taqbuffer（Mg++ contained） 2.5uL
DMSO 2uL
dNTP(买来的浓度 我忘了 不要加多了） 2uL
模板 0.5uL或者更少
引物 1uL
Taq 1uL 最后加
水 up to 25uL
我一般25uL P 发现和50 100一样 还省东西 很好

引物的处理： 你一般合成几个OD 1-2个足够 送来的先12000rpm离两分钟 然后加水溶比如35.5nmol 就加355uL水或TE 我一般用水 灭了分装冻-80没事的 然后溶了的Stock Solution冻-80 取一点稀释10倍 这样就是100mM稀释到10mM 这个浓度的在25或50ul体系中加入1uL
引物别加太多了 没用的 反而p不出来 你是Streptomyces？ 这个链霉菌就是这样 其他的Actenomyces也差不多
测序可能会有些问题 你在测序单上注明 高GC 70左右 他们会处理的
赞一下(10人) 回复此楼
Bemühen Sie !
9楼2009-02-25 12:06:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)
东洋坊的KOD 和Blend Taq都不错的
赞一下 回复此楼
10楼2009-02-25 12:25:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 muchong5577 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 总分293求调剂 +5 加一一九 2026-03-25 7/350 2026-03-26 10:19 by 王小欠i
[考研] 0856求调剂 +6 zhn03 2026-03-25 7/350 2026-03-26 08:51 by zhyzzh
[考研] 316求调剂 +9 梁茜雯 2026-03-19 9/450 2026-03-25 23:01 by peike
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭