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muchong5577金虫 (正式写手)
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引物快到了，PCR用什么酶比较好？
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| 请问大家，从放线菌基因组扩增几条800bp到1200bp、GC含量为70-75%的片段，用什么酶比较好？ |
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muchong5577
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7楼2009-02-23 19:24:58
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lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦~ 2-23 21:46
lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦~ 2-23 21:46
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这个GC比有点高 如果你不愿意用比较贵的酶，那么可以用Promega的GoTaq配合添加DMSO来做，这个是入门级的方法，当然比较折腾。或许可以试试看不加DMSO，然后把变性提高到95℃，1min试试 还有一些扩增能力比较强的酶，一般不用DMSO，如Invitrogen的白金Taq，这个会稍微贵一点 另外也有一些日系的产品会有很多针对性的酶，比如KOD FX，广告是卖得挺好的，不知道实际如何，这个不算太贵 不推荐使用Takara的酶，保证折腾死你…… 如果不愁经费，那么用扩增能力强的酶，一次过做出来，不折腾 如果那个啥的话，经典的方法就是添加DMSO了，具体浓度需要自己摸 一般从2%加到15%左右，以1%为梯度摸 |
2楼2009-02-23 17:04:00
chemifunan
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4楼2009-02-23 18:50:34
chemifunan
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5楼2009-02-23 18:52:22
