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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 啊啊啊 酵母PCR求助！！！
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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)

[求助] 啊啊啊 酵母PCR求助！！！

研一实验小白最近在做这个 目的基因（大概700bp)在酵母里面 想提出来扩增 然后连上T载体 用下面方法提的基因组：
挑菌落在EP管里,加500微升pH 7.0的柠檬酸buffer悬浮，10000r/1min，去上清，再加200微升ddH2O悬浮，在沸水中煮15min，再离心，去上清液为模版PCR.
我用上清液跑过一次胶 跑出来是这样(图1）很亮的一坨全部挤在很小的bp...这样对吗？
然后PCR 10微升的体系 程序常规 就跑不出来（图2），有时很淡很淡 引物二聚体很亮 。好几天了 不知道怎么办 求各位大神帮忙！！！！

啊啊啊 酵母PCR求助！！！


啊啊啊 酵母PCR求助！！！-1


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1楼 2017-11-10 10:45:18
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Yxijaier

铜虫 (小有名气)
提取方法感觉有问题
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提供专业级ChIP-seq、ATAC-seq、MeRIP-seq、RIP-seq等表观技术服务
2楼2017-11-10 10:59:21
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MAAAYUUU

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Yxijaier at 2017-11-10 10:59:21
提取方法感觉有问题

啊啊 那请问一下怎么优化一下

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3楼2017-11-10 11:54:57
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sunlike230

铁杆木虫 (正式写手)
楼主太折腾了，直接挑点菌体做模板，直接PCR就行了。

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4楼2017-11-14 19:55:57
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