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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取RNA的时候总是有DNA污染
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leannele

金虫 (小有名气)
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提取RNA的时候总是有DNA污染
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各位虫友，本人最近提取藻的RNA，用了艾德莱和华越洋的试剂盒，都有去除基因组DNA的步骤。我在反转录后做PCR的时候经常是两条带，直接用RNA做模板确实跑出来一条目的条带，同时也有一条大点的带。有人说用RNA也能作为模板进行PCR。
现在卡在这里实验没法往下进行，求各位支招，多谢

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1楼 2017-11-02 11:21:34
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Study-create

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by leannele at 2017-11-02 11:21:34
各位虫友，本人最近提取藻的RNA，用了艾德莱和华越洋的试剂盒，都有去除基因组DNA的步骤。我在反转录后做PCR的时候经常是两条带，直接用RNA做模板确实跑出来一条目的条带，同时也有一条大点的带。有人说用RNA也能作 ...

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16楼2017-11-02 12:48:00
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bbass533

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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17楼2017-11-02 16:53:15
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leannele

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by bbass533 at 2017-11-02 16:53:15
你用RNA后续是做啥实验？如果只是PCR，可以用RNA做模板啊，one-step RT PCR，有这个试剂盒的，你可以搜搜

要做定量PCR的
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18楼2017-11-06 12:01:42
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酷莱博

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不管RNA还是RT之后做pcr，RNA都要变成cDNA之后才能做pcr。确定用DNase I处理过，电泳没有DNA条带了。一般RT用oligo dt或者随机引物做扩增。也有用你想的目的片段的扩增引物做RT的。你看看你现在用的是什么引物，换oligo试试，不行换成你的基因特异性引物做了RT之后，再来pcr

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19楼2017-11-06 21:15:42
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hbabc2楼
2017-11-02 11:21   回复  
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翻译润色论文3楼
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pandongzi4楼
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jerry_19855楼
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limi10096楼
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松花江1237楼
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微笑可可8楼
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小黄人hhha9楼
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BraveSophia10楼
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lishiyun120911楼
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云儿580112楼
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bdfh13楼
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bobo87614楼
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wxiaona15楼
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