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leannele

金虫 (小有名气)


已领完
提取RNA的时候总是有DNA污染
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各位虫友,本人最近提取藻的RNA,用了艾德莱和华越洋的试剂盒,都有去除基因组DNA的步骤。我在反转录后做PCR的时候经常是两条带,直接用RNA做模板确实跑出来一条目的条带,同时也有一条大点的带。有人说用RNA也能作为模板进行PCR。
现在卡在这里实验没法往下进行,求各位支招,多谢

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Study-create

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
1楼: Originally posted by leannele at 2017-11-02 11:21:34
各位虫友,本人最近提取藻的RNA,用了艾德莱和华越洋的试剂盒,都有去除基因组DNA的步骤。我在反转录后做PCR的时候经常是两条带,直接用RNA做模板确实跑出来一条目的条带,同时也有一条大点的带。有人说用RNA也能作 ...

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16楼2017-11-02 12:48:00
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bbass533

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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17楼2017-11-02 16:53:15
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leannele

金虫 (小有名气)


引用回帖:
17楼: Originally posted by bbass533 at 2017-11-02 16:53:15
你用RNA后续是做啥实验?如果只是PCR,可以用RNA做模板啊,one-step RT PCR,有这个试剂盒的,你可以搜搜

要做定量PCR的
18楼2017-11-06 12:01:42
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酷莱博

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不管RNA还是RT之后做pcr,RNA都要变成cDNA之后才能做pcr。确定用DNase I处理过,电泳没有DNA条带了。一般RT用oligo dt或者随机引物做扩增。也有用你想的目的片段的扩增引物做RT的。你看看你现在用的是什么引物,换oligo试试,不行换成你的基因特异性引物做了RT之后,再来pcr

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19楼2017-11-06 21:15:42
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hbabc2楼
2017-11-02 11:21   回复  
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pandongzi4楼
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limi10096楼
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云儿580112楼
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bdfh13楼
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bobo87614楼
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wxiaona15楼
2017-11-02 11:49   回复  
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