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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 提取的rna,和反转录都出现的怪状，不知原因
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cifer1230

金虫 (著名写手)

[交流] 提取的rna,和反转录都出现的怪状，不知原因

最近刚提取的rna ,并不是三条带，很奇怪，多条带，以为能用呢，后来就进行了反转录，跑pcr,内参居然出现两条带，甚是奇怪，求分析原因。我的反转录试剂换了，之前用的康为的，这次用的宝生物。也不应该是这个问题吧？？？

提取的rna,和反转录都出现的怪状，不知原因
rna1.png


提取的rna,和反转录都出现的怪状，不知原因-1
rna2.png


提取的rna,和反转录都出现的怪状，不知原因-2
rna3.png


提取的rna,和反转录都出现的怪状，不知原因-3
内参1.png
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1楼 2017-10-31 19:55:44
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-11-03 07:47:31
染料不够，28S容易不出。另外有些提取试剂盒，会丢失5s。你这个marker多少的，对应先看看丢的是哪个

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3楼2017-11-01 08:04:13
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-11-03 07:47:12
如果混入DNA多的话，DNA也作为模板扩增出带哦
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8楼2017-11-02 15:48:31
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cosmos796

禁虫 (职业作家)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
14楼2017-12-22 18:58:50
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普通回帖

山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
是不是染料加的不够

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2楼2017-11-01 08:01:30
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cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2017-11-01 08:01:30
是不是染料加的不够

我是用EB染得色
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4楼2017-11-01 08:34:57
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cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2017-11-01 08:01:30
是不是染料加的不够

我是用EB染得色
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5楼2017-11-01 08:35:03
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cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2017-11-01 08:04:13
染料不够，28S容易不出。另外有些提取试剂盒，会丢失5s。你这个marker多少的，对应先看看丢的是哪个

最后一张图是我做的pcr,我的内参，之前做的都是一条带，现在变成两条带，这整个过程就换了反转录的试剂盒，别的没换。
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6楼2017-11-01 08:37:23
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
引物特异性行不行啊，内参基因是多拷贝。
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7楼2017-11-02 15:46:41
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cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-11-02 15:48:31
如果混入DNA多的话，DNA也作为模板扩增出带哦

是啊？您的意思是我的rna纯度不好
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9楼2017-11-02 22:09:20
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cifer1230 at 2017-11-02 22:09:20
是啊？您的意思是我的rna纯度不好...

是啊
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10楼2017-11-02 23:14:37
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渊博震天

版主 (职业作家)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
请问你的RNA是提取的哪里的？用的什么试剂盒？
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11楼2017-11-03 18:52:45
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渊博震天

版主 (职业作家)
请问你的RNA是提取的哪里的？用的什么试剂盒？
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12楼2017-11-03 18:53:19
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cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-03 18:53:19
请问你的RNA是提取的哪里的？用的什么试剂盒？

细胞的，宝生物的试剂

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13楼2017-12-22 14:40:09
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cifer1230

金虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cosmos796 at 2017-12-22 18:58:50
takara反转试剂047A我们常用，反转前要有除基因组步骤

我的就是去基因组的

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15楼2018-01-27 08:20:18
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Korea??

新虫 (正式写手)
★
cifer1230(金币+1): 谢谢参与
你用的什么胶跑RNA？普通电泳么

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16楼2018-02-13 23:16:54
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Rieman

新虫 (正式写手)
换goldview吧，这个好点

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17楼2018-03-25 14:32:28
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