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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌DNA提取的方法
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meyuexo

新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌DNA提取的方法 已有1人参与

请教一下各位大神，细菌DNA提取一般用什么方法？(不用试剂盒的情况下）(如果有真菌和放线菌的DNA提取方法就更好了)还有，GUTC缓冲液怎么配制呢？谢谢各位大神!

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1楼 2017-10-25 11:14:58
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KunnkA

金虫 (小有名气)

退堂鼓表演艺术家

【答案】应助回帖

RNaseA 也可以不用，我之前提的时候基本没用过
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知行合一
5楼2017-11-21 10:15:13
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查看全部 5 个回答

xuyuzhi

新虫 (正式写手)
买试剂盒吧！便宜的很多

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17343151072目前在一道生物，常联系
2楼2017-10-25 19:27:31
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KunnkA

金虫 (小有名气)

退堂鼓表演艺术家

【答案】应助回帖

★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 有帮助 2017-11-20 15:01:40
如果是做普通的PCR检测 SDS法 提取DNA 就可以了。
(1)提取缓冲液

Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)

EDTA 50mmol/L (pH8.0)

NaCl 500 mmol/L
(2)裂解液20%SDS

(3)高盐溶液5mol/L KAc

(4) RNaseA 10mg/ml

(5) 异丙醇

(6)灭菌ddH2O或TE

方法
1取对数期生长细菌一毫升，移入离心管离心，细菌沉淀大小与绿豆粒相似即可，加有500μL提取液的离心管中,轻轻混匀。

2 向管中加入50μL20%SDS溶液，混匀，不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂 ，65℃保温10min，并不时摇动。

3 加入150μL 5mol/L KAc，混匀，置冰上20-30 min。

4 4℃,15 000rpm离心15min,转移上清到另一离心管中，加入0.7V的异丙醇，混匀，-20℃沉淀30 min 。

5 12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀，吹干后加入适量的灭菌ddH2O或TE溶解DNA。

6 加入1/10体积的RNaseA，37℃保温20min，除去RNA。

7 CI抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30 min 。12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀。

8 用400μL 70%乙醇洗一次后，吹干，加入适量的灭菌ddH2O或TE溶解DNA。
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meyuexo
知行合一
3楼2017-10-28 11:30:26
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meyuexo

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by KunnkA at 2017-10-28 11:30:26
如果是做普通的PCR检测 SDS法 提取DNA 就可以了。
(1)提取缓冲液

Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)

EDTA 50mmol/L (pH8.0)

NaCl 500 mmol/L
(2)裂解液20%SDS

(3)高盐溶液5mol/L KAc

(4) RNaseA 10mg/ml
...

谢谢

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4楼2017-11-20 14:04:56
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