应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌DNA提取的方法
51/1返回列表
查看: 1562  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

meyuexo

新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌DNA提取的方法 已有1人参与

请教一下各位大神，细菌DNA提取一般用什么方法？(不用试剂盒的情况下）(如果有真菌和放线菌的DNA提取方法就更好了)还有，GUTC缓冲液怎么配制呢？谢谢各位大神!

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-10-25 11:14:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KunnkA

金虫 (小有名气)

退堂鼓表演艺术家

【答案】应助回帖

★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 有帮助 2017-11-20 15:01:40
如果是做普通的PCR检测 SDS法 提取DNA 就可以了。
(1)提取缓冲液

Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)

EDTA 50mmol/L (pH8.0)

NaCl 500 mmol/L
(2)裂解液20%SDS

(3)高盐溶液5mol/L KAc

(4) RNaseA 10mg/ml

(5) 异丙醇

(6)灭菌ddH2O或TE

方法
1取对数期生长细菌一毫升，移入离心管离心，细菌沉淀大小与绿豆粒相似即可，加有500μL提取液的离心管中,轻轻混匀。

2 向管中加入50μL20%SDS溶液，混匀，不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂 ，65℃保温10min，并不时摇动。

3 加入150μL 5mol/L KAc，混匀，置冰上20-30 min。

4 4℃,15 000rpm离心15min,转移上清到另一离心管中，加入0.7V的异丙醇，混匀，-20℃沉淀30 min 。

5 12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀，吹干后加入适量的灭菌ddH2O或TE溶解DNA。

6 加入1/10体积的RNaseA，37℃保温20min，除去RNA。

7 CI抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30 min 。12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀。

8 用400μL 70%乙醇洗一次后，吹干，加入适量的灭菌ddH2O或TE溶解DNA。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

meyuexo
知行合一
3楼2017-10-28 11:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

xuyuzhi

新虫 (正式写手)
买试剂盒吧！便宜的很多

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
17343151072目前在一道生物，常联系
2楼2017-10-25 19:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meyuexo

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by KunnkA at 2017-10-28 11:30:26
如果是做普通的PCR检测 SDS法 提取DNA 就可以了。
(1)提取缓冲液

Tris-HCl 100mmol/L(pH8.0)

EDTA 50mmol/L (pH8.0)

NaCl 500 mmol/L
(2)裂解液20%SDS

(3)高盐溶液5mol/L KAc

(4) RNaseA 10mg/ml
...

谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
4楼2017-11-20 14:04:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

KunnkA

金虫 (小有名气)

退堂鼓表演艺术家

【答案】应助回帖

RNaseA 也可以不用，我之前提的时候基本没用过
赞一下 回复此楼
知行合一
5楼2017-11-21 10:15:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +25 医学老男孩 2026-08-13 52/2600 2026-08-15 11:49 by 大快人心啦
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +4 archvillain 2026-08-15 7/350 2026-08-15 11:44 by archvillain
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 HFw0lei2R37i 2026-08-14 9/450 2026-08-15 11:33 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +6 Ldrop2023 2026-08-13 6/300 2026-08-15 10:09 by tuanggou
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭