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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教PCR扩增拖尾 多带 如何解决之
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rongshuxia

木虫 (著名写手)

[交流] 请教PCR扩增拖尾 多带 如何解决之

少部分样品，条带很好
大部分，出现拖尾 多带等现象。

退火温度 降落PCR  再扩增也试过了

目前准备：1、重新设计引物 2、做克隆，以前没做过，听说也不难

请教各位虫子高手，能否通过PCR扩出理想的目的片断？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-18 at 10:25 ]
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1楼 2009-02-19 16:48:40
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diarylili

我也遇到同样的问题，请教中
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2楼2009-02-19 16:57:39
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shenshanhaiguai

铁虫 (初入文坛)
应该是引物设计的问题 吧，错配的位点太多了 吧。
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3楼2009-02-19 17:29:27
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，欢迎常来~ 2-24 13:44
降低镁离子浓度试试，Mg2+是Taq DNA聚合酶活性所必需的,Mg2+浓度除影响酶活性与忠实性外,也影响引物的退火, 模板与PCR产物的解链温度,产物的特异性引物二聚体的形成等。Mg2+浓度过低时,酶活力明显降低;过高时,酶可催化非特异性扩增。PCR中Mg2+浓度在0.5～2.5mmol/L之间。如果溶液中存在EDTA,或在引物贮备液中有其他螯合物或者DNA模板,会干扰Mg2+的浓度。因此,要适当调整Mg2+的用量。
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帮助虫友，提升自己
4楼2009-02-19 18:29:57
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，欢迎常来~ 2-24 13:44
模板量太高
酶量太高
退火温度太低
离子强度不合适（按说明书推荐的来）
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5楼2009-02-19 18:48:36
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jqq1985

银虫 (正式写手)
引物量减少点可以减少拖尾
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6楼2009-02-19 19:58:15
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icicle_me

铜虫 (初入文坛)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):3Q~ 2-24 13:44
Heteroduplexes in mixed template amplifications formation consequence and elimination by reconditioning PCR
这篇文章有介绍，扩增不特异时可采用的方法：反应30个循环后，将原体系用新的体系稀释十倍后在扩增3个循环
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7楼2009-02-19 23:30:05
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rongshuxia

木虫 (著名写手)
谢谢！！！
引用回帖:
Originally posted by shenshanhaiguai at 2009-2-19 17:29:
应该是引物设计的问题 吧，错配的位点太多了 吧。

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8楼2009-02-20 14:35:27
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rongshuxia

木虫 (著名写手)
文章下下来了，多谢！！

谢谢楼上的几位朋友
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9楼2009-02-20 14:50:23
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yumo

新虫 (小有名气)
前几天我也遇到过这样的问题。后来在一个相对低一点的温度先做了几个循环，再将温度提高到正常循环的温度就解决了这个问题。
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10楼2009-02-20 22:09:06
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