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rongshuxia

木虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 4902.9
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帖子: 1762
在线: 490.8小时
虫号: 431387
注册: 2007-08-11
性别: GG
专业: 微生物资源与分类学

[交流] 请教PCR扩增拖尾多带如何解决之

少部分样品，条带很好
大部分，出现拖尾多带等现象。

退火温度降落PCR 再扩增也试过了

目前准备：1、重新设计引物 2、做克隆，以前没做过，听说也不难

请教各位虫子高手，能否通过PCR扩出理想的目的片断？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-18 at 10:25 ]

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寻找合作团队已经有4人回复

1楼 2009-02-19 16:48:40

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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

应助: 58 (初中生)
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红花: 12
帖子: 1250
在线: 469.8小时
虫号: 224872
注册: 2006-03-22
性别: GG
专业: 环境微生物学

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，欢迎常来~ 2-24 13:44

降低镁离子浓度试试，Mg2+是Taq DNA聚合酶活性所必需的,Mg2+浓度除影响酶活性与忠实性外,也影响引物的退火, 模板与PCR产物的解链温度,产物的特异性引物二聚体的形成等。Mg2+浓度过低时,酶活力明显降低;过高时,酶可催化非特异性扩增。PCR中Mg2+浓度在0.5～2.5mmol/L之间。如果溶液中存在EDTA,或在引物贮备液中有其他螯合物或者DNA模板,会干扰Mg2+的浓度。因此,要适当调整Mg2+的用量。