24小时热门版块排行榜

返回列表

小小小小小小柔

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 28
帖子: 5
在线: 2小时
虫号: 7277084
注册: 2017-10-09
专业: 生化分析及生物传感

[求助] T4 DNA连接酶怎么提高连接效率已有2人参与

我用T4 DNA 连接酶连接磷酸化以后的5'和3'的羟基，请问怎么提高连接效率。我用的条件是25℃过夜，酶浓度是DNA浓度的10倍，求大神指点

发自小木虫Android客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有201人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

连接时载体去磷已经有10人回复

1楼 2017-10-09 20:13:52

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

晋鹏

版主 (知名作家)

MolEPI: 6
应助: 626 (博士)
贵宾: 0.096
金币: 27592.6
散金: 1052
红花: 288
沙发: 2
帖子: 5663
在线: 726.4小时
虫号: 1183978
注册: 2011-01-05
性别: GG
专业: 生物信息学
管辖: 农林

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

以T4连接酶进行连接的方法，这两种方法转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，一般快速连接方法需要半个小时到一个小时；达到最佳的效果，要过夜连接。

以拓扑异构酶（TOPO）进行连接的方法，这种方法的优势是快速连接，在5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体中，阳性率比较高，这种方法国内也有人模仿。这种方法虽然速度快，但是也有一些缺陷，比如长片段连接效率不如T4连接酶，转化子少，TOPO酶对温度很敏感，稳定性较差。