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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助RT-PCR引物验证的方法
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碇元渡

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 求助RT-PCR引物验证的方法 已有1人参与

本人要做干细胞成脂分化的实验，,相通过RT-PCR的方法检测分化后的细胞中目的基因的表达量。订购了RT-PCR要用的内参引物和目的基因引物，但刚刚接触RT-PCR，不知道怎么验证内参引物好用不好用，需要看哪些参数，比如熔解曲线之类。烦请大家提供一下粗略的方案、方法。
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她是我的梦工厂。
1楼 2017-09-30 13:08:15
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山还在那儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
碇元渡: 金币+100, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2017-10-03 09:41:17
验证RT-PCR体系（引物）好坏，一般通过标准曲线验证：
1.RT-PCR曲线应顺滑，拐点清楚，基线期，指数期，平台期三期明显；
2.扩增效率应在90%-110%之间；
3.如果是染料法，溶解曲线仅有一个主峰；’
4.NTC不加模板的对照应无扩增曲线，或者扩增曲线起峰时间大于35个循环；

如有其它问题，欢迎及时沟通，祝实验顺利！
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2017-09-30 14:07:06
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