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碇元渡至尊木虫 (著名写手)
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[求助]
求助RT-PCR引物验证的方法 已有1人参与
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| 本人要做干细胞成脂分化的实验，,相通过RT-PCR的方法检测分化后的细胞中目的基因的表达量。订购了RT-PCR要用的内参引物和目的基因引物，但刚刚接触RT-PCR，不知道怎么验证内参引物好用不好用，需要看哪些参数，比如熔解曲线之类。烦请大家提供一下粗略的方案、方法。 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
碇元渡: 金币+100, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2017-10-03 09:41:17
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碇元渡: 金币+100, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2017-10-03 09:41:17
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验证RT-PCR体系（引物）好坏，一般通过标准曲线验证： 1.RT-PCR曲线应顺滑，拐点清楚，基线期，指数期，平台期三期明显； 2.扩增效率应在90%-110%之间； 3.如果是染料法，溶解曲线仅有一个主峰；’ 4.NTC不加模板的对照应无扩增曲线，或者扩增曲线起峰时间大于35个循环； 如有其它问题，欢迎及时沟通，祝实验顺利！ |
2楼2017-09-30 14:07:06